赵学良医生的科普号

1985年Shalaby把单核细胞和巨噬细胞产生的肿瘤坏死因子命名TNF-α。人类的TNF-α基因长约276kb，定位于第6对和第17对染色体上[1] 。TNF-α出现在炎症的初期，是机体炎症与免疫反应应答的重要调节因子，分离银屑病皮损处T细胞，通过流式细胞仪分析发现大部分CD4+和CD8+T细胞分泌TNF-αTNF2α[3,4]。TNF可诱导角质形成细胞和血管内皮细胞表达细胞间黏附分子( ICAM21) , 从而提供中性粒细胞与淋巴细胞的黏附位点,活化中性粒细胞与血管内皮细胞引起机体强烈的炎症反应,释放炎性介质,加剧局部的炎症反应,产生典型银屑病皮损。银[5]屑病皮损处和关节囊滑液培养TNF2α受体p75, p55高度表达, TNF2α与培养的人角质形成细胞和p75结合后可诱导角质形成细胞表达ICAM21,促进炎症细胞与表皮细胞的黏附。p55 可诱导真皮内浸润单核细胞(MNC) 向表皮浸润,同时结合诱导其他炎性细胞因子和黏附分子的表达,从而参与局部炎症浸润,导致银屑病的发生[6]。TNF - α可通过诱导T 细胞表达VEGF mRNA (血管内表皮细胞生长因子) 。VEGF是一种促血管形成、增加血管通透性的细胞因子,与银屑病斑块形成、真皮乳头层毛细血管扩张、扭曲密切相关。银屑病是一种常见的以角质形成细胞过度增生、炎症细胞浸润和新生血管形成为主要组织病理改变的慢性炎症性疾病，病因复杂，发病机制尚未完全明了。近年来研究表明，Th1细胞细胞因子（主要有IL-2、IFN-g、TNF-α、IL-6、IL-8、IL-12、IL-18等）减少导致Th1/ Th2细胞因子失衡，是引起银屑病发病的主要原因[7]。但免疫功能异常特别是T细胞活化及功能亢进是一个重要因素[8]。有证据显示寻常型银屑病是一种T细胞介导的免疫性皮肤病目前在银屑病机制研究中，T细胞调节紊乱占主导地位，在一定的遗传背景基础上，有T淋巴细胞表型和功能的变化，释放相关的细胞因子，诱导表皮角质形成细胞呈高增殖状态和异常分化而诱发银屑病。银屑病以表皮角质形成细胞过度增生和淋巴细胞浸润为特征。免疫异常在其发病过程中起着重要作用。免疫调节主要是通过细胞因子相互作用来实现的，银屑病皮损和／或外周血存在TNF-α及其受体的异常。 研究表明，银屑病皮损TNF-α的免疫反应性和生物学活性明显升高。冻融的银屑病皮损上清液含有大量的TNF-α；角质形成细胞、血管内皮细胞和表皮树突状细胞上的粘附分子表达增高，角质形成细胞和真皮血管内皮细胞上的TNF-α表达增高，提示TNF-α可能通过干预银屑病皮损区粘附分子表达而参与银屑病的发生。多数学者认为，银屑病是Th1细胞为主的免疫性疾病。TNF-α是重要的促炎症性细胞因子，能促进Th1型的免疫反应，促进炎症细胞浸润与表皮细胞增生，导致更多的T细胞活化而引起放大效应。Kristensen等研究[9,10]表明，在银屑病患者的皮肤损伤中发现高表达的TNF-α，且具有高于正常人的免疫反应性和生物学活性。以上研究都表明TNF-α与银屑病的发病密切相关。TNF-α是一种重要的促炎症性细胞因子，主要有巨噬细胞、树枝状细胞、角质形成细胞等产生，以调节Th1细胞为主。TNF-α能促进银屑病表皮细胞增值，调节免疫反应的信号网络，增强中性粒细胞趋化，协助炎症细胞穿透血管壁和促进多种细胞因子等炎症介质的释放，从而促进炎症反应；有学者建议将TNF-α水平作为评价银屑病治疗效果的一项指标[11]。TNF-α能诱导内皮细胞表达ICAM-1,促进炎症细胞与表皮血管内皮细胞的相互作用，也能诱导角质细胞表达ICAM-1，促进炎症细胞与表皮细胞粘附，在其刺激下可产生更多的细胞因子。皮损增高的TNF-α可刺激角质形成细胞、真皮纤维母细胞等相互作用，从而导致表皮、真皮的过度增殖和炎性浸润。研究发现银屑病患者血清中TNF-α水平异常增高，并且具有高于正常人的免疫反应性和生物活性，与疾病严重程度成正相关。TNF-α对各种组织的作用受其浓度所调节，低浓度引起组织变化，高浓度引起休克和死亡。有研究表明，银屑病皮损中存在着TNF-α的过量表达。TTNF-α在银屑病炎症上起一定作用，且TNF-α由皮损局部产生。有人通过实验又证实：银屑病治疗有效时，吸疱液中TNF-α水平下降，在银屑病斑片皮损获得的疱液中TNF-α水平，比本受累皮肤获得的泡液中水平，比正常皮肤要高，血清水平低于疱液，提示此由局部产生， 国内外报道寻常型银屑病患者外周血TNF-α水平明显高于健康人，且分别与PASI评分成正相关[12,13]。Mussi等研究发现银屑病患者外周血TNF-α的血清水平明显上升，并与疾病的严重程度密切相关[14]。随后Asadullah等在对银屑病患者巨细胞病毒与 TNF-α关系的研究中也观察到血清TNF-α水平增高[15]。TNF2α在银屑病的发病机理中有着重要的作用, TNF2α很可能是银屑病炎症反应的始动因素,增加其活化T细胞的能力,加强银屑病病灶内角质形成细胞的增生,因此抑制TNF2α活性,就有可能抑制银屑病的炎症反应。目前, 针对TNF2α已成功地开发了英利昔和依纳西普两种药物。英利昔( infliximab)是TNF2α单克隆嵌合抗体。可高效特异性与TNF2α结合,使TNF2α不能与其受体结合,发挥病理作用。该药首用于一位患有顽固性炎症性肠病的老年女性银屑病患者,治疗后获得了惊人的疗效[16]。Ogilivie等[17]用Infliximab治疗6例甲氨蝶呤治疗无效的关节病型银屑病患者获得成功,治疗10周后无论皮肤症状还是关节症状均明显减轻。Chaudhari等[18]对Infliximab治疗中、重度银屑病的疗效进行了研究,使用Infliximab 10 mg/kg/周,产生效果时间平均为4周。依纳西普( etanercep t)是人源可溶性TNF2α受体P75与IgGl Fc段的重组体,可以与TNF2α竞争性结合达到使TNF2α不与细胞上TNF2α受体结合,从而抑制TNF2α的作用[19] 。Cather等[20]用双盲空白对照治疗60例关节型银屑病患者, Et2anercep t 25mg皮下注射每周2 次,连续12周, 30例患者中70%以上的关节症状改善, 26%的患者75%以上的皮损有改善, 46%的患者皮损均有改善。我们知道，紫外线是波长200纳米到400纳米的连续光谱，其中长波紫外线(UVA，400~320纳米)和中波紫外线(UVB，320~280纳米)都可以用来治疗银屑病。但是，不同的光谱对人体皮肤的生物学作用差别很大，有的能够起到治疗银屑病等疾病的作用，有的效果可能差一些，而还有些光谱不但没有治疗作用还会引起一定的副作用如发生严重红斑、色素沉着、甚至引发皮肤肿瘤。 科学家通过精细的研究，对作用不同的紫外线光谱进行了区分，发现对银屑病、玫瑰糠疹等皮肤病具有肯定治疗效果而基本没有副作用的光谱波长有300纳米、308纳米和311纳米的中波紫外线。制造出只产生单一有效中波紫外线光谱的仪器就是窄谱中波紫外线(NB-UVB)治疗仪，利用NB-UVB治疗银屑病等皮肤病。正是因为有了其他治疗方法不可比拟的上述优势，NB-UVB正在受到越来越多的医师和银屑病患者的欢迎。紫外线照射治疗银屑病已经在临床应用了将一个世纪，近年出现的窄谱中波紫外线（波长311 nm），因其疗效显著，操作简便易行，副作用小，远期致癌作用远远低于其他紫外线，已经取代传统的UVA。与普通UVB相比, 311 nm窄谱UVB照射能够穿透入真皮层，可清除皮损内异常的免疫细胞，诱导表皮和真皮T细胞凋亡，其中T细胞是照射后最易发生凋亡的免疫细胞，还可诱导人角质形成细胞凋亡。表达一些自身抗原以及分泌多种细胞因子等，同时可明显抑制朗格汉斯细胞等抗原递呈细胞的活性，减轻表皮的炎症反应。有研究[21]表明应用窄谱UVB照射治疗银屑病的疗效优于宽谱UVB照射治疗。此外与普通-UVB相比，NB-UVB避开了DNA的吸收峰值，不易引起DNA的突变，所以其致癌性较低。目前尚无NB-UVB照射引起人体肿瘤的相关报道[22]。国内周敏等采用NB-UVB治疗银屑病发现随病情好转，病人血清TNF-α和IL-12水平明显下降，分析NB-UVB可能透入表皮及真皮浅层，抑制T细胞，降低细胞因子含量而治疗银屑病[23]。修志民等采用NB-UVB治疗寻常型银屑病发现疗效好，不良反应少；并降低患者血清TNF-α和IL-8水平[24]。钟金宝等将120例银屑病随机分为两组，治疗组用NB-UVB照射治疗，对照组内服迪银片，两组均以一个月为一疗程，两个疗程后进行疗效判定，检测患者治疗前后血清肿瘤坏死因子-α、白介素-2水平,。结果显示治疗组基本治愈率及总有效率高与对照组。两组治疗后血清肿瘤坏死因子-α、白介素-2水平较治疗前降低，治疗组优于对照组。得出结论：NB-UVB照射是治疗银屑病安全有效的方法，可能通过降低患者血清TNF-α和IL-2水平起作用[25]。参考文献[ 1 ] 余传霖,熊思东. 分子免疫学[M ]. 上海:复旦大学出版社, 2001. 1235 - 1253.[ 2 ] 赵辨. 临床皮肤病学[M ]. 第3版. 南京:江苏科学技术出版社, 2001. 759 - 765.[ 3 ] Austin LM, 0zawa M, Kikuchi T, et al. Themajority of ep idermal in p soriatic patients[ J ]. J Invest Dermatol, 1999, 113 ( 5 ) : 752-759.[ 4 ] Duan H, Kohda T. Interleukin282positiveneutro phils in p soriasis[ J ]. J Dermatol Sci,2001, 26 (2) : 119 - 124.[ 5 ] Bryan PP, Fred GW,Mark AG. Pathophysiology and treatmend of p soriasis [ J ]. AM J Heaith Syst Pham, 2000. 57: 645.[ 6 ] Patsch G,Wagner E, Leeb BF, et al. Up regulation of cytokine recep tors sTNF2R55, sTNFR75, and sIL22R in p soriasis arthritissynovial fluid [ J ]. J Rheumatol, 1998, 25:105 - 110.[7] Kastelan M,Massari LP,Pasic A,et al. New trend in the inmmunopathogenesis of psoriasis.Acta Dermatovenenerol Croat 2004:12（1）：26-29.[8] 管海宏，刘玉峰，沈柱.天然免疫紊乱与银屑病. 国外医学皮肤性病学分册2005；31：285-287.[9] Kristensen M, Chu CQ, Eedy DJ,et al. Localization of tu-mour necrosis factor-alpha(TNF-α)and its receptors in nor-mal and psoriatic skin: epidermal cells express the 55-kDbut not the 75-kD TNF receptor[J].Clin Exp Immunol,1993, 94(2):354-362.[10]张春玲,谢志宏.银屑病患者血清中细胞因子TNF-α和IL-6测定临床皮肤科杂志2000;29:276-277.[11]Gisondi P，Gubinelli E,Cocuroccia B,et al.Targeting tumor nerosis factor –alpha in the therapy of psoriasis .Curr Drug Targets Inflamm Allergy 2004；3（2）：175-183.[12]张春红，张春敏，史永俭等.血清骨桥蛋白和肿瘤坏死因子α水平与寻常型银屑病活动性的相关性.中国麻风皮肤病杂志 2010；26（2）：85-86.[13] Gisondi P，Gubinelli E,Cocuroccia B,et al.Targeting tumor nerosis factor –alpha in the therapy of psoriasis .Curr Drug Targets Inflamm Allergy 2004；3（2）：175-183.[14]Mussi A, Bonifati C ，Carducci M. et al.Serum TNF-alpha level corrlate with disease severity and are reduced by effective therapy in plaque-type psoriasis. J Biol Regul Homeost Agents，1977,11：115-118.[15]Asadullah K, Prosch S, Audring H, et al. A high prevalence of cytomegalovirus antigenaemia in patients with moderate to severe chronic plaque psoriasis ： an association with systemic tumour nercrosis factor alphfa overexpression. Br J Dermatol， 1999,141：94-102.[ 16 ] Oh CJ, Das KM, Gottlieb AB. Treatmentwith anti tumor necrosis factor alpha ( TNFalpha)monoclonal activity of dramatically decrease the clinical activity of p soriasis lesions [ J ]. J Am Acad Dermatol, 2000, 42 ( 5 Ptl) : 829 - 830.[ 17 ] Ogilvie Al, Antoni C, Dechant C, et al.Treatment of p soriatic arthritis with antitumour necrosis factor alpha antibody clearsskin 1esions of p soriasis resistant to treatment with methotrexate[ J ]. Br J Dermatol, 2001,144: 587 - 589.[ 18 ] Chaudhari U, Romano P, Mulcahy LD, etal. Effcacy and safety of infliximab monotherapy for p laque type p soriasis: a randomizedtrial[ J ]. Lancet, 2001, 357: 1842 - 1847.[ 19] Zeltser R,Valle L, Tanck C, et al. Clinical,histological, and immunophenotyp ic characteristics of injection site reactions associatedwith etanercep t: a recombinant tumor necrosis factor alpha recep ter: Fc fusion Protein[ J ].Arch Dermatol, 2001, 137: 893 - 899.[ 20 ] Mease PJ, Goffe BS,Metz J, et al. Etanercep t in the treatment of p soriasis arthritisandp soriasis: a randomised trial [ J ]. Lancet,2000, 356 (9227) : 385 - 390.[21] Walters IB, Burack LH, Coven TR, et al. Suberythemogenic nar-rowband UVB is markedly more effective than conventional UVB intreatment of psoriasis vulgaris. J Am Acad Dermatol 1999;40:893-900.[22]崔欣.窄谱中波紫外线治疗寻常型银屑病的机制与临床应用.中国皮肤性病学杂志2004;18:690-691.[23]周敏，丰世科，陈金等.NB-UVB治疗银屑病的疗效及治疗前后血清TNF-α和IL-12的变化.中华皮肤科杂志 2010；2（26）：108-110[24]修志民，刘杰，何勇等. 窄谱中波紫外线治疗寻常型斑块状银屑病患者血清肿瘤坏死因子-α、白介素-8水平的影响. 中国实验诊断学.2008；12（10）：1279-1280.[25]钟金宝，梁艳华，李仰琪等. 窄谱中波紫外线对寻常型银屑病患者血清肿瘤坏死因子-α、白介素-2的影响及疗效. 岭南皮肤性病科杂志. 2008；15（4）：211-213.

一、预防性HPV疫苗 迄今有3种以病毒结构蛋白L1环化而成的病毒样颗粒（58VLP）为基础的预防性HPV疫苗被批准上市。2006年批准的4价疫苗Gardasil/Silgard；2007年的2价疫苗Cervarix；2014年的9价疫苗Gardasil-9。 二、HPV预防性疫苗的免疫保护作用 （一）对女性的免疫保护作用：低年龄段接种者抗体产生能力更强，抗体保护作用也更强。3种疫苗有预防HPV新发或持续性感染、降低生殖器疣发生率及预防CIN的作用，且既往未感染HPV的女性接种效果好。总体2价疫苗与4价疫苗的免疫保护作用基本一致，而2价疫苗的性价比更具优势。9价疫苗可以预防更多型HPV感染而被认为可更大程度预防宫颈癌。 （二）对男性的免疫保护作用：无HPV感染史男性接种疫苗后预防相关外生殖器病变的作用达90%。对总体人群（有或无HPV感染）的免疫保护作用较低。 （三）HPV疫苗的交叉保护作用：病毒系统发育过程中，HPV16型与HPV31和33型有关，HPV18与HPV45有关。2价和4价疫苗能刺激机体产生针对非疫苗覆盖HPV亚型的交叉保护抗体，如针对HPV31、33和45的交叉保护。 （四）不同HPV疫苗的免疫原性比较：青年女性和12 ~ 15岁青少年女性接种3次2价和4价疫苗，5年后血清抗HPV16抗体阳性滴度都很高。25 ~ 45岁妇女接种2价疫苗诱导的抗HPV18抗体峰值明显低于年轻女性接种者。9价疫苗有类似的抗体滴度下降现象。 （五）对生殖道疣和癌前病变发病率的影响：澳大利亚和丹麦年轻女性大面积接种HPV疫苗后，生殖道疣发病率显著下降，未免疫接种的男性HPV感染和生殖器疣发病率也明显下降，25 ~ 29岁女性高级别CIN 发病率下降达17%。类似结果在瑞典和美国的大样本研究中也观察到。 （六）预防口咽癌：3种HPV疫苗对预防口咽癌尚缺乏有效评估。一项7 466例随机双盲临床试验表明，2 910例接种疫苗后仅1例HPV阳性，对照组2 924例中15例HPV阳性，疫苗预防口腔感染HPV估计效力为93%。 三、疫苗安全性 注射部位轻微反应是最常见不良事件。严重不良事件的报道罕见，未能确定与疫苗的相关性。世界卫生组织（WHO）全球疫苗安全咨询委员会声明，HPV疫苗的获益仍高于风险。 四、预防性HPV疫苗接种的推荐 （一）女性免疫接种的推荐：已有多个指南委员会推荐应用HPV预防性疫苗。各指南的常规免疫接种年龄段均相同，但追加免疫年龄范围有所不同。接种最佳时间为首次发生性行为前，随后接种年龄放宽到26岁，大于26岁仍有HPV感染风险。 （二）男性HPV疫苗免疫接种的推荐：男性可接种4价HPV疫苗预防生殖器疣，可间接降低女性HPV感染和宫颈癌风险。男性11 ~ 12岁应常规接种疫苗，13 ~ 21岁可追加接种，22 ~ 26岁高危人群，如果既往未接种HPV疫苗，推荐接种。 （三）特殊人群的免疫接种： 1. 妊娠与哺乳期女性：尚无该疫苗对妊娠造成危害的证据，但不推荐妊娠期使用。 2. 已有宫颈异常或生殖器疣的女性：有生殖器疣、异常细胞学或非HPV疫苗覆盖型的HPV DNA检测结果阳性者，疫苗接种仍能防护未感染HPV型感染。 3. 免疫抑制或免疫功能受损的宿主：美国免疫接种实践咨询委员会推荐对尚未接种HPV疫苗的免疫功能受损的26岁及以下患者进行HPV疫苗接种。 五、预防性HPV疫苗的展望

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人类乳头瘤状病毒持续感染与一过性感染者外周血CD4+ CD25+ Foxp3+调节性T细胞变化 李惠1 赵学良2 王辉2 程芳1 金小力1 目的 了解人类乳头瘤状病毒（HPV）持续感染者与一过性感染者细胞免疫状态的差异。方法 采用基因扩增技术及导流杂交技术检测局部脱落细胞的HPV，根据感染时长分为持续感染组和一过性感染组；选择同期健康体检者作为正常对照组，采用流式细胞技术测定三组受检者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞（Treg细胞 ）水平。结果 共筛查出HPV感染者143例，其中持续感染者36例，一过性感染者107例，HPV感染者外周血Treg细胞比值水平为（7.72±2.08）%，显著高于正常对照组（5.28±1.21）%（P＜0.05），持续感染组为（8.23±2.08）%，显著高于一过性感染组（7.55±2.07） %，（P＜0.05）。结论 HPV感染者细胞免疫受抑制，外周血Treg细胞数量增加，持续感染者胞免疫受抑制的程度较一过性感染者更显著。 关键词 HPV持续感染 ；CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞（Treg细胞 ）；细胞免疫 【Abstract】 Objective To understand the differences between the cellular immune status of （human papillomavirus , HPV） persistent infection and a transient infection. Method HPV of local shedding cells were detected by gene amplification and hybridization. According to the duration of infection, the infection group was divided into a continuous infection group and a transient infection group; select health person as the normal control group at the same time. the level of peripheral blood CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T cells(Treg cells) was detected by flow cytometry in the three groups . Result HPV infection was detected in 143 cases, including 36 cases of persistent infection, 107 基金项目：潍坊市科学技术发展计划项目（201302029）[作者单位]：1、潍坊医学院 山东 潍坊 261052；2、潍坊市人民医院皮肤科 山东 潍坊 261041 [通讯作者]：王辉，E-mail：wanghui_8998@sina.com cases of transient infection. The level of peripheral blood Treg cells in the HPV infected individuals was （7.72±2.08）% significantly higher than the normal control group （5.28±1.21）%（P＜0.05）; the level of peripheral blood Treg cells in the 36 cases of HPV persistent infection was （8.23±2.08）% significantly higher than（7.55±2.07）% in the 107 transient infection cases（P＜0.05） . Conclusion The cellular immunity in HPV infected individuals was Inhibition ，The number of Treg cells in the peripheral blood of the HPV infected individuals was increased.The degree of inhibition of the cellular immunity of the cases of persistent infection was significantly higher than that of the cases of transient infection. Key words HPV persistent infection ；CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T cells(Treg cells) ；The cellular immunity 人体接触人类乳头瘤病毒（HPV）后，并非都会感染HPV，HPV 感染与机体免疫功能密切相关[1]，尤其是细胞免疫功能低下或紊乱有密切关系，CD4+ CD25+ Foxp3+调节性T细胞（Treg细胞 ）的细胞数量和功能异常与病毒感染性疾病的发生、发展关系密切[2]，我们检测了143例HPV感染者外周血Treg细胞水平，其中， HPV持续感染者36例，HPV一过性感染者107例，观察两组HPV感染者细胞免疫功能变化，现报道如下。 1 资料与方法 1.1 临床资料 受试者来源于2011年6月至2015年6月我科皮肤科门诊主动要求做HPV检测者和尖锐湿疣患者的配偶及性伴，局部脱落细胞检测HPV阳性但未发生尖锐湿疣。 1.2 诊断 受试者分别于就诊当日和第6个月、第12个月，各检测一次HPV，同一患者两次或两次以上检测到相同亚型的HPV ，认定为HPV 持续感染； 同一患者三次检测仅一次阳性则认定为HPV一过性感染[3]。对高危型HPV感染时间12月及以上，并经阴道镜下宫颈组织多点活检排除宫颈鳞状上皮内瘤变 （ＣＩＮ）和宫颈癌。病例排除：同一患者两次检测到非同亚型HPV，3个月内接受全身或局部的免疫治疗,患有自身免疫性疾病和其他感染性疾病、应激状态(如妊娠、哺乳及长期服用避孕药等)。 1.3 HPV检测 ⑴ 标本采集 : 用一次性无菌采样刷擦拭男性受试者包皮及龟头冠状沟表面至少三次，将带有脱落细胞的采样棉签放入装有细胞保存液的取样管中，以同样的方法采取女性宫颈口脱落细胞，标本置于-20℃冰箱保存。⑵ 检测方法：采用广东凯普生物化学有限公司提供的人类乳头瘤病毒（HPV）分型试剂盒（PCR+膜杂交法）。采用罗氏480ⅡPCR扩增仪和HybriMax医用核酸分子快速杂交仪。基本原理为基因扩增技术及导流杂交原理，可检测出21种HPV亚型包括6，11，16，18，31，33，35，39，42，43，44，45，51，52，53，56，58，59，66，68，和CP8304（81）。ＨＰＶ基因亚型检测步骤ＤＮＡ提取、聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增、导流杂交等步骤，均严格按照试剂盒说明书进行操作。 1.4 Treg细胞检测 ⑴ 试剂与仪器：荧光标记单克隆抗体CD4-FITC、CD25-APC、Foxp3-PE及同型对照小鼠IgG1-FITC、IgG1-PE、IgG1- APC、荧光标准微球及破膜固定液均购自美国Beeton Dickinsml公司。淋巴细胞分离液购自中国医学科学院生物医学工程研究所。流式细胞仪型号为FACSCalibur 为美国Beeton Dickinsml公司产品。⑵实验方法：抽取静脉血4ml，肝素抗凝。Ficoll密度梯度离心法用淋巴细胞分离液常规分离单一核细胞，调整细胞数为10х106/ml,取两支试管，分别加入100 ?l细胞悬液(1х106),分为同型对照管和检测管。同型对照管加小鼠IgG1-FITC 及IgG1- APC 10l，检测管加CD4-FITC及CD25-APC 10?l荧光标记单抗，室温避光孵育30min；PBS洗涤后，固定破膜，然后同型对照管加IgG1-PE、检测管加Foxp3-PE抗体各10?l，室温避光孵育30min。PBS洗涤后，重悬细胞，上机测定。以CD4+CD25+Foxp3+T细胞/ CD4+ T细胞比值表示Treg细胞水平。 1.5 统计学分析 采用SPSS 19统计软件进行数据处理，外周血Treg细胞比值水平用(x_ ± s)%表示，组间比较采用T检验，多组比较采用单因素方差分析，P

本人经验体会，免疫功能下降是主要原因：劳累，焦虑，失眠，恐惧。其次是治疗方法不恰当，如：迷信偏方，不去除幼体单纯吃药。2，治疗时幼体去除不彻底，3，个人感觉孤立的单个疣体即使大，治疗后也不容易复发，小而多的疣体容易复发，怀孕，合并其他慢性病易复发。有些人，什么情况没有也反复发作，推测可能与感染病毒类型有关，或者个人卫生习惯有关。