流感嗜血杆菌如何培养
很多基层医院因为刚建立微生物室,由于缺乏经验,可能都面临一个问题:为什么明明流感嗜血杆菌是常见的社区呼吸道细菌感染的病原菌,但是就培养不出来呢?针对这个问题,在这里介绍一下我们微生物室的一些经验,供大家参考一下。要提高流感嗜血杆菌培养的阳性率,首先需要了解一下流感嗜血杆菌的一些特点01致病性特点流感嗜血杆菌致病性:流感嗜血杆菌是儿童时期细菌性脑膜炎、肺炎和菌血症的主要细菌性病原,同时还可导致儿童中耳炎、上颌窦炎、急性会厌炎、化脓性关节炎和眼内炎等重视送检标本质量:根据该菌的致病特点,我们一定要重视儿童送检的标本,比如其诱导痰、耳分泌物、咽拭子、眼分泌物等。02生长特性流感嗜血杆菌生长特性:嗜血杆菌培养的适宜温度为37℃,PH值7.6,培养需5%~10%二氧化碳促进生长,所以一定要放置在5%二氧化碳孵箱内进行培养。特殊培养基:由于该菌氧化还原酶系统不完善,生长时需要V和X因两种生长辅助因子,所以需要使用特殊的培养基,即嗜血杆菌巧克力琼脂,该巧克力琼脂中需加入300ug/ml杆菌肽或50ug/ml万古霉素抑制革兰阳性需氧菌的生长,该培养基已有商品化试剂,无需自配。及时接种:由于此菌抵抗力较弱,50到56℃,30min即可杀死,对一般消毒药剂很敏感,所以需要及时送往实验室及时接种。03菌落特点菌落生长特性:由于该菌生长缓慢,所以一般培养24h后,在巧克力平皿上流感嗜血杆菌生长的菌落为无色透明、半透明或灰白色、湿润、露滴状,不溶血,有时菌落很小,需用放大镜观察,很容易漏检,所以建议培养48h再观察一次(如图1)。菌落大小:因培养基不同,菌落直径范围在0.2到1.5毫米。有吲哚气味,有荚膜的流感嗜血杆菌形成光滑的菌落,并且该菌落比同样过夜培养的无荚膜的菌落大。图片图104革兰染色特性革兰染色特性:流感嗜血杆菌为球杆菌或短小杆菌,革兰氏染色阴性,有时成双端染色,呈明显的多形性,从0.3到1.5um,宽为0.3到0.4为um,无芽孢和鞭毛,无动力,有或无荚膜(在陈旧培养物中,由于自溶酶的作用,菌膜可消失),如图2。图片图205流感嗜血杆菌鉴定方法通过质谱技术进行鉴定:该方法需要购买微生物质谱仪,胜在能快速、准确得出结果。商品化的生化鉴定系统:需根据各实验室自身使用的细菌鉴定系统选择相应的商品化鉴定试剂。利用“卫星现象”试验:用接种环调取单个流感嗜血杆菌菌落或纯培养物,交错密图划线接种于血琼脂平板上,再将金黄色葡萄球菌的幼龄培养物划线或点中于琼脂表面,经37℃24h培养后,越接近金黄色葡萄球菌周围,菌落长得越大,而远离金黄色葡萄球菌的区域则无菌落生长,此为卫星现象。同时接种血琼脂平板和MH平板还可以大致区分流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌。如图3,图4。图片图3图片图406流感嗜血杆菌传统生化反应试验吲哚试验:流感嗜血杆菌分解色氨酸产生靛基质,靛基质与对二甲基氨基苯甲醛作用生成玫瑰吲哚而成红色,无色为阴性。脲酶反应:流感嗜血杆菌能产生尿素酶,分解尿素产生氨,使培养基变为碱性,酚红呈粉红色。鸟氨酸代谢:流感嗜血杆菌可产生氨基酸脱羧酶,使氨基酸脱羧,生成氨类和二氧化碳,使培养基变碱性,使指示剂甲酚紫呈现紫色,黄色为阴性。V和X因子生长需求试验:该方法需购买V因子、X因子、X+V因子纸片,但该纸片一般不易购买。综上所述,如果要提高流感嗜血杆菌培养的阳性率,一定要根据该菌的生长和致病特点,重视儿童标本采集质量,选择适宜其生长的5%二氧化碳孵箱和嗜血巧克力琼脂进行培养才能成功。希望本文能为各基层医院提高流感嗜血杆菌培养的阳性率起到作用。