【摘要】 目的 探讨对哮喘者进行自血穴位注射治疗过程中的护理措施,观察各种护理措施的临床效果。方法 采用回顾性观察193例哮喘患者的穴位注射治疗护理过程,从而总结出护理体会。结果 193例患者整个治疗
[摘要] 目的 探讨自血穴位注射疗法治疗哮喘的分子机制。 方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,半定量测定自血穴位注射疗法治疗前后哮喘患者外周血单个核细胞(PBMC)中IL-4、IL-5、IL-10mRNA的表达情况。 结果 急性期时哮喘患者PBMC中IL-4mRNA与IL-5mRNA表达均增强,经自血穴位疗法治疗后,其表达同时显著降低;IL-10mRNA经自血穴位疗法治疗后表达显著升高。 结论 自血穴位注射疗法通过在基因转录水平抑制IL-4、IL-5的表达,增强IL-10的表达而发挥其对哮喘的治疗作用。[关键词] 哮喘 自血疗法 白细胞介素-4 白细胞介素-5 白细胞介素-10 支气管哮喘是一种由多种细胞因子和炎性介质参与的气道慢性炎症性疾病,本试验通过研究自血穴位注射疗法对哮喘患者治疗前后外周血单个核细胞(PBMCs) IL-4mRNA、IL-5 mRNA、IL-10 mRNA表达的影响,探讨其对哮喘基因表达及调控的影响,力图从基因表达水平阐明自血穴位注射疗法对哮喘作用的分子机制,为穴位注射疗法治疗疾病提供科学依据。材料和方法1、 主要试剂:总RNA提取试剂盒为GENTRA公司的RNA Isolation Kit;RT-PCR试剂盒为INVITROGEN公司产品。2、 引物的设计与合成:引物由上海申能博彩生物科技有限公司设计合成。 IL-4(375bp) 上游:5’-CTT CCC CCT CTG TTC TTC CTG CTA-3’下游:5’ CGT ACT CTG GTT GGC TTC CTT CAC 3’IL-5(239bp)上游:5’-ACC TTG GCA CTG CTT TCT ACT CA-3’下游:5’-ACT CTC CGT CTT TCT TCT CCA CAC-3’IL-10(309bp)上游:5’-CTG CTC TGT TGC CTG GTC CTC CTG-3’下游:5’-ATG CGC CTT GAT GTC TGG GTC TTG-3’3、 主要仪器: 3K18高速冷冻离心机(Sigma),LABOR-220电子天平(岛津),Mini电泳系统(Bio-rad),Spec 3000紫外/可见光分光度计(Amersham),Multi Genius凝胶成像系统(Syngene),2400PCR仪(PE)。4、 实验方法与步骤4.1 标本采集 根据中华医学会制定的哮喘诊断标准,于哮喘患者急性发作期和治疗缓解期分别肘静脉采血1ml,放入冻存管,置液氮中保存。4.2 总RNA提取及纯度检测 用GENTRA公司的RNA Isolation Kit提取总RNA,放-80℃冰箱保存。1.5%琼脂糖电泳检测其完整性。用紫外分光光度计测定样品在260nm/280nm比值及浓度。4.3 RT:取总RNA1ug,加50uM Oligo(dT)201ul,10mM dNTP混合物2ul,加灭菌水至总体积为12ul,小心混匀后于PCR仪上65℃孵育5分钟,取出后立即置于冰上。依次加入下列试剂:5倍RT 缓冲液4ul、0.1M DTT1ul、 RNA酶抑制剂1ul、DEPC处理水1ul、ThermoScripTM逆转录酶1ul,小心混匀后于PCR仪上55℃孵育30分钟、85℃5分钟,冰上冷却,立即PCR或置于-20℃保存。PCR:各样品取RT产物2ul再依次加入下列试剂:10倍PCR缓冲液5ul、50mM MgCL21.5ul、10mM dNTP混合物1ul、10uM上游引物1ul、10uM下游引物1ul、Platimun Taq酶0.4ul(2U)、灭菌水38.1ul,总体积为50ul,混匀后进行PCR扩增。反应条件为:IL-4、IL-10为94℃预变性2分钟,94℃变性30秒,58℃退火45秒,72℃延伸1分钟,共35个循环; IL-5、β-actin为94℃预变性2分钟,94℃变性30秒,55℃退火45秒,72℃延伸1分钟,共35个循环。4.4 电泳:各取PCR扩增产物10ul,加6×加样缓冲液,1.5%的琼脂糖凝胶电泳,电泳缓冲液为0.5×TBE,100伏恒压电泳1.5小时,经0.5ug/ml的溴乙淀(EB)染色10分钟,于凝胶成像系统中照像。并用凝胶成像系统自带分析软件分析,获得每一标本的各白细胞介素与内参β-actin PCR扩增产物的光密度比值,确定IL-4、IL-5和IL-10的mRNA表达半定量值。4.5 统计学处理:采用t检验。结 果一、总RNA 纯度鉴定260mm/280mm比值为1.8~2.0,琼脂糖凝胶电泳显示28S、18S两条带清晰,且前者的荧光强度约为后者的2倍,无其它大分子条带,表明总RNA无蛋白质污染,无降解。(补充图为) 二、IL-4mRNA表达的变化 M 1前 1后 2前 2后 3前 3后 4前 4后 5前 5后 6前 6后 7前 7后 8前 8后 M三、IL-5mRNA表达的变化M 1前 1后 2前 2后 3前 3后 4前 4后 5前 5后 6前 6后 7前 7后 8前 8后 M四、IL-10mRNA表达的变化M 1前 1后 2前 2后 3前 3后 4前 4后 5前 5后 6前 6后 7前 7后 8前 8后 M实验结果讨论:RT-PCR法以其灵敏、快速、简便、所需RNA量少等特点而广泛应用于基因mRNA表达的检测。由实验图谱我们可以看出,总体而言:哮喘病人经自血疗法后,其白介素4、5的表达下降,而白介素10的表达升高,反映自血疗法对哮喘确有一定疗效。具体有的病人的治疗前后表达量改变不明显,有的是因为病人治疗前的表达即无异常,有的可能是个体的基因多态性,当然,也不排除PCR技术本身的原因。
南海哮喘之家十多年来,已收治近十对双胞胎哮喘患儿。从他们的不同病程、发育和治疗到后来康复,可从中可知其对人的摧残程度: 一对来自番禺的10岁李姓小姐妹,2006年10月患病的姐姐来诊时身高只有1.2米
皮质醇升高--自血穴位注射治疗哮喘的之一机理?摘要 目的 探讨自血穴位注射疗法对中重度皮质醇低下哮喘患者皮质醇的影响,观察穴位注射治疗前后哮喘患者的病情改善情况。方法 临床选择20例中重度皮质醇低下哮喘患者,治疗期间给以西药表面激素、抗白三烯、β受体激动剂、茶碱、抗组胺等和中医自血穴位注射疗法。予自血穴位注射疗法3个疗程,每个疗程5次,每次隔一天,每个疗程之间隔10天,整个治疗共50天。治疗前后测定早上8时血浆皮质醇水平,并计算ACT和症状计分。结果 治疗前哮喘患者皮质醇区间聚集在66±10nmol/L,治疗后皮质醇区间聚集在222±10 nmol/L,治疗前后平均升高156±10 nmol/L。ACT评分从17.8分升至22.3分;症状计分日间平均从2.26分降至0.32分;夜间平均从2.01分降至0.15分。讨论 皮质醇通过①抑制炎性因子的合成,诱导炎性细胞的凋亡,收缩血管并抑制蛋白水解酶的释放,抑制单核细胞、中性白细胞和MΦ向炎症部位的募集和吞噬功能而达到抗炎作用;②通过促进淋巴细胞的破坏和解体达到抗过敏作用。哮喘是由多种细胞特别是肥大细胞、嗜酸性粒细胞和T淋巴细胞参与的慢性气道炎症。皮质醇通过抗炎、抗过敏而起到治疗哮喘的作用。故本临床观察认为皮质醇水平低为长期哮喘反复发病难愈机理之一。林红伍认为夜间血浆皮质醇水平的降低及正常血浆皮质醇水平昼夜变化规律的紊乱是导致哮喘患者夜间发作的可能原因。临床观察20例哮喘患者治疗前均有长期大量服用或静脉使用激素病史,大量激素的长期使用可抑制下丘脑一垂体一肾上腺皮质轴(HPAA)、引起机体免疫力低下,黄益萍认为皮质醇水平低下可能为下丘脑一垂体一肾上腺皮质轴(HPAA)的功能受损有关。自血穴位注射疗法能起到部分激素样作用、改善HPAA轴功能紊乱,提高皮质醇水平,进而治疗哮喘。结论 自血穴位注射可提高皮质醇,且哮喘患者皮质醇水平正常后,可继续起消炎、免疫抑制等作用,从而达到治疗哮喘的功效。这可能是自血穴注的机理之一。其它的临床和动物实验也已证实:自血穴注可提高干扰素水平,并有其它如炎症细胞因子等的变化,这需要我们进一步探讨。关键词 哮喘 皮质醇 自血穴位注射Cortisol Elevation( Rising up )——the Mechanism of the Theropy of Self-blood Acupoint-jinjecting in Treatment of Asthma?Abstract objective To explore the influence of acupoint autohemotherapy to the asthma patient with moderate or serious extent of low level of cortisol and observe the improvement before and after the treatment.Methods 20 cases of asthma patients with moderate or serious extent of low level of cortisol were assigned. During the treatments, Surface inhaled corticosteroids,antileukotriens, β receptor agonists,theophylline,anti-histamine and the influence of acupoint autohemotherapy were applied. The influence of acupoint autohemotherapy were applied for 3 sessions, with 5 treatments being a therapeutic session, once every other day, with an intervel of 10 days between two sessions and totally for 50 days. Before and after the treatments, the level of cortisol in the plasma at 8 o'clock were tested and the ACT and symptom scores were accounted.Results The level of cortisol of the asthma patient were 66±10nmol/L before treatment and 222±10 nmol/L after treatment. On average it elevates 156±10 nmol/L after the treatment.The ACT scores elevate from 17.8 points to 22.3 points.Daytime symptom scores reduce averagely from 2.26 to 0.32, and at night the symptom scores reduce averagely 2.01 to 0.15.Discussion The mechanisms of cortisol are as follows: First, by inhibiting the synthesis of inflammatory factors, inducing the apoptosis of inflammatory cells, contracting the vessels, inhibiting the release of proteolylic enzymes, inhibiting the collection of monocytes, neutrophile granulocytes to the inflammatory regions and the phagocytose, the cortisol performs the anti-inflammation effects. Second, by accelerating the damage and dissolution of the lymphocytes, the cortisol performs the anti-allergy effects. Asthma is a kind of chronic airway inflammation in which multiple cells such as mastocytes, eosinophile granulocytes and T lymphocytes participate. With the anti-inflammation and anti-allergy effects, the cortisol could be applied in the treatment of asthma.This clinical study thinks(shows) that low level of cortisol could be the mechanism to the astmatic patients who were repeated onseted and difficultly to treat. HongWu Ling thinks(pointed out) that it could be the possible causedescription that it lead to asthma patient attack with low level of plasma cortisol at night and the disorders of diunal variation regularity of normal level of plasma cortisol .This 20 cases of asthma patients have long-term largely taken or intravenously injected hormone history. Taking largely hormone in a long-term can inhibit the hypothalamus-pituitary-adrenal cortical axis(HPAA) and cause low immunity. YiPing Huang thinkspp that the low level of cortisol could related to the impaired function of HPAA.. The influence of acupoint autohemotherapy can play a part role of hormone ,imporve the dysfunction of HPAA, increase the level of cortisol.It explains to treat asthma.Conclusion The influence of acupoint autohemotherapy could increase the level of cortisol and the normal level of cortisol could go on performing the anti-inflammation and immune-inhibition effects hence treats asthma, which maybe is one of the mechanisms of the influence of acupoint autohemotherapy. The other clinical and animal experiments have demostrated that the influence of acupoint autohemotherapy could increase the content of interferon and have the changes such as inflammatory cytokines, which need to be further explored in the longer terms.Keywords asthma,cortisol, the influence of acupoint autohemotherapy参考文献1.黄益萍.哮喘儿童ACTH、皮质醇RIA.放射免疫学杂志.1995,8(1):36-37.2.林红伍,陆卫国.夜间哮喘与血浆皮质醇变化的关系.天津医药.1991,1:36-38.3.于永锋,潘玉娟,曲政海,等.长期吸入糖皮质激素对支气管哮喘儿童血清皮质醇、生长激素-胰岛素样生长因子系统的影响.实用儿科临床杂志.2007,22(4):275-276.4.林茂华,杨清儒,邓彪,等.右归饮汤剂对难治性哮喘患者血浆皮质醇及免疫球蛋白水平的影响. 临床和实验医学杂志.2007,6(2):129-130.5.李俊雄,老昌辉,俞瑜,等.自血混合丙种球蛋白穴注治疗哮喘的临床研究.新中医.2001,33(10):44-45.6.张汉民,李俊雄,俞瑜,等.自血混合丙球穴注对哮喘豚鼠肺组织中受体的影响. 中国中医基础医学杂志.2001,7(8):27-28.7.李俊雄,胡岳山,等.自血穴位注射疗法对哮喘患者IL一4、IL-5、IL—IOmRNA表达的影响.中医外治杂志.2005,14(3):10-11. 附:作者:甘长朋 学校:广州中医药大学 指导老师:李俊雄教授 专业:中医学七年制 通讯地址:佛山市南海区罗村城中路61号502 邮编:528226联系电话:15813474648 e-mail:ganchangpeng@126.com
哮喘之家是防治哮喘的好形式 广东省南海中医院 李俊雄 张汉民 梁可云 郑盛杰 叶婉萍摘要 广东省南海哮喘之家自1994年运作以来,紧紧抓住以中医药为本,以现代医学为后盾,以科研为先导,开展了各项有利于
(梁某,男,31岁,患哮喘病13年) 就在儿时,我便有长期的鼻塞流涕,容易感冒,而且常常是由于天气变化或者闻及烟味就会加重,体质可说是很差。13年前因为感冒,引起气促,甚至出现呼吸困难,在夜间严重影响睡眠。 后来在佛山的大医院确诊为哮喘,按照西医的一套方法吃药、打针、吊水等等,效果都不甚明显,每次缓解一下,不久就又复发,而且越来越重。我心里很焦急,工作之余,到处打听治疗哮喘的医院,也自己翻了不少资料,也去过不少佛山、广州的医院,尤其在广州某大医院看的时间最长,看到医生都觉得害怕了。滴针至自己手臂血管都日见干沽,到处是针眼,夏天都不敢穿短袖出街。甚至有几次病情加重而去医院抢救。总之,哮喘折磨得我很痛苦,真的使得我身心疲惫! 前年,偶然听到报纸上有“南海哮喘之家”的报道,“打穴位”,等的报道,抱着试一试的心态,我来到南海中医院找到了李主任。第一次听到“抽自己血打穴位”的方法,开始觉得太简单了,能有效吗?但看到络绎不绝的就诊病人,就试着开始了第一个疗程的注射。在这里,居然没有开什么激素,有也只是吸入的干粉,而最令我开心的是基本没有打过吊针!拿着中药和“苍蝇拍”(蛤蚧)高高兴兴回家。当打到第二个疗程时候,神奇的是气喘明显减少了,“感冒”也少了! 在南海中医院就诊的时候,我学到很多关于中医治疗哮喘的生活起居、饮食注意,“多食D靓也”“打下球,游下水”……于是我照足落单做足全套,还坚持练习咏春拳。现在我已打了5个疗程的穴位,摆脱了“气喘”这个窒息之手的控制,我觉得很高兴,也觉得很幸运遇到李主任,他的简单而有效的中医方法,以及他的治疗哮喘特色思路,真是一盏明灯,把我从失望的苦海中挽救回来。 万分感谢南海哮喘之家,感谢中医,他们使我又充满信心的回到安居乐业的人生中!
2010-3-15 来源: 珠江时报九江的小男孩关丰文是南海年纪最小的冬泳者本报讯(记者 余晖) 上周四最冷气温仅7℃,但九江5岁的小男孩关丰文仍在西江游泳。日前,记者了解到,他是目前南海年纪最小的冬泳者,是什么让他如此坚持呢?小男孩冬泳 岸边掌声一片上周四傍晚5点多,记者来到九江的西江边,夕阳西下,照得河水闪着粼粼金光,一群冬泳爱好者陆续脱衣下水。一会,一个瘦小的男孩在妈妈的陪同下出现了,马上引起了大家关注。“关丰文,你来啦!”叔叔伯伯们亲昵地向他打招呼。当时气温很低,记者穿着厚厚的衣服,仍冷得在河边打颤,但关丰文的妈妈冯女士,仍然给关丰文脱得只剩一条小裤衩,让他下了水。 “他多大了?”旁观者纷纷问。“5岁多了。”妈妈说。关丰文从脱衣到下水,都是全场关注焦点,有几个人还拿出相机来拍摄。他每游一个来回,岸边的人都鼓掌叫好。游了5分多钟后,关丰文在掌声和赞叹声中上水,妈妈赶紧用大毛巾把他包住。 每次冬泳,总是有人拿相机或摄像机对着关丰文拍。九江游泳分会副会长冯树锵说,关丰文是目前南海冬游年纪最小的,甚至可能是佛山年纪最小的冬泳者。 为治哮喘病 每天傍晚游泳 关丰文从去年8月开始游泳,到了冬天最冷的时候也没有停止,坚持每天傍晚游泳5-10分钟。关丰文从小就是家人的小宝贝。他两岁多时患上哮喘,每次天气转变之前,他必定咳喘不停,要上医院看医生,成了家中的“小气象台”。 经常生病影响了关丰文身体发育,他看起来比同龄孩子要瘦小些。于是南海哮喘之家医生建议在规范化治疗和“自血穴位注射疗法”初步稳定后游泳。在妈妈的带领下,小丰文从炎夏坚持游到寒冬。为了推广游泳防治哮喘,广东省中医哮喘联盟、南海哮喘之家及佛山五区中医院,将从今年4月份开始,不定期组织游泳运动。