崔向荣医生的科普号

崔向荣，副主任医师，医学博士，医学遗传学博士后，硕士研究生导师崔向荣，副主任医师，医学博士，医学遗传学博士后，山西医科大学/山西中医药大学硕士研究生导师（妇产科学），美国爱荷华大学医学院访问学者，捷克国家自然科学基金项目评审专家，山西省科技厅专家库专家，山西省首批“三晋英才”之青年优秀人才，中医傅青主女科流派传承人。兼任：中国中西医结合医学会检验医学分会肿瘤分子诊断专家委员会委员，中国医学装备协会现场快速检测装备技术分会青年委员会委员，山西省性学会基层男科分会委员会委员，山西省老年医学会检验医学分会理事，国际学术期刊《FrontiersinEndocrinology》杂志客座主编。截止目前主持国家自然科学基金、中国博士后基金、国家卫健委配子及生殖道异常研究重点实验室开放课题、山西省卫健委重点实验室项目、山西省自然科学基金、山西省留学回国人员基金、山西中医药管理局课题，山西省留学回国人员择优资助项目各1项。对复发性流产诊治、遗传优生咨询、产前诊断有丰富经验，对基因诊断、辅助生殖胚胎植入前遗传学检测（PGT）技术有深入研究。善于中医、中西医结合治疗各种不孕症、反复胎停流产，熟练开展各种妇科宫、腹腔镜手术。

前段时间生殖小青年就复发性流产和反复移植失败的患者进行主动免疫治疗的原因及流程进行了简单介绍。可有些患者又问会不会是由遗传因素引起的呢？那今天生殖小青年就复发性流产的PGS进行简单介绍，希望能为大家提供帮助，起到答疑解惑的目的！重复介绍一下复发性流产的临床界定复发性自然流产（RSA）是指临床上连续2次或2次以上的自然流产（包括：多次生化妊娠、空孕囊、无胎心、胎心消失等），是一种常见的妊娠并发症，发生率占妊娠总数的0.4%～0.8%。RSA 中约有40%～80%临床上找不到明确病因，称为不明原因反复自然流产。反复种植失败的定义并没有统一的标准，大家比较认同的定义为：重复IVF治疗超过 3个移植周期；或者累计移植≥10个高评分胚胎未能怀孕者；或者各中心自定义移植胚胎数目。由于近年来单胚胎移植和囊胚培养技术普及，过去的标准显然不适用了，因此有人提出以胚胎计算的标准，如累计移植4枚高评分胚胎，或2枚囊胚仍然不能怀孕者。为什么反复重植失败要做PGS复发性流产和反复种植失败的己知原因可分为染色体异常、子宫结构异常、内分泌异常、免疫功能异常、感染因素、遗传性凝血异常及环境因素。不明原因的复发性流产严重影响患者夫妇的生理及心理健康，是生殖医学的难题。其潜在的原因复杂多变，目前认为母胎界面异常、免疫因素等都是其可能的原因。另外,胎儿染色体异常为不明原因复发性流产的重要因素之一，尤其是对于前几次流产未行绒毛检测患者或者高育龄且符合助孕指征的患者来说PGS是必要的，可以从胚胎学角度减少复发性流产的发生。PGD和PGS概念的简介介绍PGD是指在体外受精过程中，对具有遗传病风险患者的胚胎进行种植前活检和遗传学分析，以选择无遗传学疾病的胚胎植入宫腔，从而获得正常胎儿的诊断方法，可有效地防止遗传病患儿的出生。PGS 是指胚胎植入之前，采用与PGD相同的技术手段对胚胎染色体的非整倍性进行检测，分析胚胎是否有染色体数目和结构异常的一种早期产前筛查方法。PGD是直接靶向已知致病遗传因素的检测，目的是阻断相关遗传病在家系中的进一步传递。PGS的筛查内容不局限于特定致病遗传因素，其最终目的选择无染色体异常的胚胎进行移植，提高临床妊娠率，降低流产率，降低遗传病的发病率。PGD和 PGS属于产前诊断的一种方式，其发其在其他诊断的最早阶段，避免了以往产前诊断方式可能的治疗性引产给母体带来精神和身体上的创伤，受到了广大生殖领域和遗传领域专家们的关注。由于目前复发流产的患者不断增多，本文主要对本中心所采用的PGS诊断技术进行详细解释卵胞浆内单精子显微注射技术（ICSI）控制性超促排卵：根据患者情况选择合适的促排卵方案，包括长方案、短方案、超短方案、超长方案、措抗剂方案、自然周期与微刺激方案；取卵：于注射人绒毛膜促性腺激素36小时左右手术室经阴道超声引导下取卵；精液处理：精液采集时间应为禁欲后2~7天。精液采集在取精室进行，以手淫法采集，并射入专用取精杯内。精液处理方法为密度梯度离心法和上游法。体外受精（ICSI）：取卵后4~6小时进行卵胞浆内单精子显微注射（ICSI）。ICSI前卵子需在透明质酸酶中剥离颗粒细胞，脱颗粒一般在取卵后2~4小时进行。ICSI受精后，16~18h后根据原核及第二极体的数目检查受精的情况。ICSI具体过程如下：（1）在显微针固定管内装上显微注射针和持针，在10×物镜下，使显微注射针和持针对齐。显微注射针与培养皿底平行或尖端稍朝下；（2）将卵子放入ICSI操作皿中的卵子滴中，1个卵子/每滴；（3）将ICSI操作皿放于显微镜上，将显微注射针放入PVP滴中，平衡压力后，移入培养液长滴边沿吸入活动精子，再移回PVP滴中释放出来，在40×物镜下，寻找正常形态精子制动，制动过程为：将显微注射针尖端抬高，置于精子尾部中上1/3处上方，压住精子使其不能前行，将显微注射针尖端快速滑过精子尾部。有时需要多次制动。（4）将已制动精子吸入显微注射针，尾部先吸入，精子置于显微注射针的尖端，将显微注射针移到卵子滴。（5）在卵子滴内找到卵子，将成熟卵子用显微持针吸住，第一极体位于6或12点的位置。卵子应靠在操作皿的底部，这样注射时可有支持。（6）将显微注射针的尖端和卵子边缘同时清楚聚焦，使它们在同一平面。选择3点钟方位注射精子，将精子尽可能移至显微注射针的尖端，以减少进入卵子的PVP。（7）将显微注射针的尖端刺过透明带和卵细胞膜，显微注射针尖端进入卵子直径的1/2-3/4处。吸取卵胞浆进入显微注射针，当出现胞浆突然快速通过显微注射针（表明卵膜吸破）时，停止吸入。缓慢将吐出的卵浆和精子注入卵子内，退出显微注射针。（8）按序注射所有成熟卵子，每个卵子在洗涤皿中洗涤后，依次放入培养皿中的培养微滴中，置于CO2培养箱中培养。胚胎培养：胚胎用培养液微滴法进行培养。前二天采用生长培养液G-1.5+5%HSA，第三天则更换生长培养液G-2.5+5%HSA。对受精情况，胚胎生长情况，囊胚生长情况进行评价，选择合适的胚胎或囊胚进行活检。胚胎评级2PN 评级：根据合子中原核内核仁的大小、数量及其与合子中心区位置关系，将其分为Z1、Z2、Z3、Z4。Z1：原核等大紧挨，核仁大，数量等多，沿相邻缘排列，核周晕明显；Z2：原核等大紧挨，核仁大，数量等多，核仁散在排列，核周晕较明显；Z3：原核等大紧挨，核仁不等大，数量不等多，核仁一侧排列、另一侧散在，核周晕不明显；Z4：原核不等大或有距离，核仁小，大小不一致，核仁排列杂乱，无核周晕。胚胎评级：根据卵裂球数目、形态和胞浆碎片等参数将胚胎分为4级。1级胚胎为细胞数8~10，卵裂球大小均匀，胞浆碎片小于10%，无多核，无空泡；2级胚胎为细胞数大于10或6~7之间，卵裂球大小均匀或只有一个不均，胞浆碎片小于15%，无多核，无空泡；3级胚胎为细胞数4~5，卵裂球大小不均数小于等于2，胞浆碎片小于20%，无多核，空泡无或较少；4级胚胎为细胞数2~3，卵裂球大小不均数大于等于3，胞浆碎片大于20%，有多12核，有空泡。2级及其以上为优质胚胎，3级及其以上为可用胚胎，4级为废弃胚胎。囊胚评级：采用Gardner评分法。首先根据囊胚的扩张和孵出状态评为1~6级。1级为早期囊胚，特点是囊腔的体积小于胚胎的l/2；2级囊胚，其特点为囊腔的体积大于胚胎的l/2；3级为完全囊胚，其整个胚胎被囊腔充满；4级为扩张期囊胚，囊腔继续扩张，胚胎直径变大，透明带与原来比变薄；5级为正在孵出的囊胚，此时囊胚从透明带中部分孵出；6级为已孵出的囊胚，此时囊胚从透明带中完全孵出。囊胚评级同时参考内细胞团（ICM）和滋养外胚层。内细胞团包裹紧密，有很多细胞，则为A级；细胞较分散，仅有少数的细胞则为B级；有很少量的细胞则为C级。滋养外胚层若有很多细胞形成连续的上皮则评为A级；若由较少的细胞形成疏松的上皮则为B级；若仅有很少的几个大细胞则评为C级。胚胎活检：目前较为常用的活检方法为采取的为激光法进行透明带去除并取材。卵裂期活检是从第3天卵裂期的胚胎中获取1~2个的卵裂球；囊胚期活检采用的方法是，在第三天胚胎透明带上打一个小洞，然后继续培养以便一些滋养外胚层细胞能够长出来，在第五天进行活检，囊胚活检通常能获得5~10个细胞。胚胎植入前遗传学筛查技术由于本中心与华大基因合作采用高通量测序对胚胎进行植入前遗传学筛查，胚胎植入前遗传学筛查最大的特点便是进行单细胞测序，所以本文主要对单细胞高通量测序在胚胎植入前遗传学筛查中的应用进行简单介绍：单细胞基因组测序主要包括四个步骤：单细胞分离→全基因组扩增→高通量测序→数据分析。其中，单细胞分离及全基因组扩增对最终结果的准确性起到了关键作用。单细胞全基因组扩增（sigma 试剂盒, DOP-PCR 技术原理）单细胞裂解：（1）分离单细胞，PBS 溶解，置于 200uLPCR管中。（2）加水至终体积 9uL。（3）准备细胞裂解缓冲液：2uL蛋白酶K溶于32ul 10*单细胞裂解液中，振荡至彻底混匀。（4）向步骤（2）单细胞样品中加入 1uL新鲜制备好的细胞裂解缓冲液，混匀。（5）上一步骤得到的混合液孵育：50℃1h，99℃4min（需精确），置冰上冷却，离心。文库制备：（1）孵育后的产物中加入2ul1*single cell Library Preparation Buffer。（2）再加入 1uL library stabilization solution. （3）混匀，95℃ 2min。（4）置冰上冷却，离心，再置于冰上。（5）加入1uL libraryPreparation Enzyme，混匀并短暂离心。（6）加热样品：16℃20min，24℃20min，37℃20min，75℃5min，4℃维持。（7）从加热仪上取下样品，立即扩增或者-20℃保存3天。扩增：（1）向以上反应产物中加入以下试剂：7.5uL 的10*Amplification Master Mix，48.5uL的Water Molecular Biology Reagent，5.0uL 的 WGA DNA Polymerae。（2）混合均匀，离心，然后开始热循环：95℃3min 和 94℃30s 共25个循环周期，然后 65℃5min，随后放置在 4℃中维持，反应完成后，-20℃保存。扩增产物浓度检测：使用QubitFluorometer检测定量，DNA总量不低于0.5μg，才能进行下一步的测序。扩增产物完整性检测：使用1%琼脂糖凝胶电泳，加入试剂盒Controllane进行判断，135V，40min。观察样本电泳条带大小范围（条带下限在250bp以上且上限不小于1000bp）视为完整。高通量测序（high-throughput sequencing）待测片段与微球体连接：（1）细胞的 mRNA 在生物素标记的寡核苷酸引物作用下反转录合成为 cDNA双链。（2）在 DpnⅡ限制性内切酶作用下使cDNA 双链片段化，在标记的生物素作用下纯化。（3）将纯化后的 cDNA 片段与载体（含有32 bp 序列标签）相连，利用序列标签上的 PCR 引物扩增 cDNA 片段。（4）cDNA 模板制备：利用酶切作用制备成 cDNA片段与 32 bp 标签相连接的线性片段。（5）cDNA 模板与微球体（直径为 5μm）相连。cDNA 序列测定：（1）消化结合在微球体上的 cDNA 模板：消化成含有 4 个碱基末端的 cDNA模板（ⅡS 型限制性酶 BbvⅠ能够在距离识别位点第 9 和 13 个碱基的位置分别切割 cDNA 双链）。（2）洗去寡核苷酸连接接头。（3）将含有 4 个碱基末端的 cDNA 模板进行序列测定，通过荧光显微照片可以读出 cDNA 模板的序列。结果判读：华大基因进行的高通量测序能够检测出基因片段＞1Mb的缺失重复，但认为染色体数目异常或者缺失、重复＞16Mb 为染色体异常。我中心采用基于高通量测序技术的PGS对体外受精的胚胎进行染色体检测，挑选染色体正常的胚胎植入到子宫，以提高试管婴儿的成功率，使更多的不孕不育患者受惠于此，特别是在目前中国二孩政策的前提下，对于降低出生缺陷，提高中国优生优育水平起到关键作用，可以降低老百姓生育缺陷儿的痛苦，提高中国人口质量。

最近有患者经常向我咨询，为什么做唐氏筛查，需要告知检验科医师准确的孕周时间，这个有必要吗？针对这类型的问题生殖小青年，就对患者朋友进行一个简单普及！其实我们通常所说的唐氏筛查往往指的是唐氏血清学筛，而除了唐氏血清复查以外我们还有很多筛查遗传病的方法，目前较为普及的便是通过二代测序进行的无创产前筛查（NIPT）和超声筛查等。还有像我们所说的有创性产前诊断，它主要通过取胎儿细胞，进行细胞培养，进而染色体核型分析，是目前诊断的金标准。包括早孕基（9-12周）绒毛穿刺、中孕期（16-22周）的羊膜腔穿刺及中晚期（21-39周）的脐血穿刺。但是这些方法呢，技术及设备条件要求要要、周期长、标本采集为侵入性操作，费用昂贵，同时像穿刺诊断还有流产的风险。所以很多普通患者还是更倾向于相对便宜、无创的唐氏血清学筛查，所以今天生殖小青年还是为大家介绍最为传统的无创血清学筛查。首先我们来介绍一下什么是唐氏综合征？唐氏综合征（Down Syndrome，DS）又称 21-三体综合征、先天愚型，是一种最常见的染色体病。我国唐氏儿发生率 1/600～1/800，但 2/3 的唐氏儿在妊娠早、中期自发流产或死胎，其实际发生率更高。唐氏儿存在严重智力障碍、体格发育障碍，50%伴有各种先天畸形，生活不能自理，至今尚无有效治疗方法。不但给患儿造成终身痛苦，也给家庭和社会带来沉重的负担。因此对胎儿进行血清学或遗传学筛查、超声检查，必要时行介入性产前诊断，防止唐氏儿出生，对提高人口素质具有重要意义。简单介绍唐氏血清学筛查的历史进程血清学筛查是指通过经济、简便、无创的检测方法，从普通人群中发现怀有唐氏综合征胎儿的高风险孕妇，以便对其进行进一步产前诊断，最大限度地减少唐氏综合症患儿出生。1984 年英国 Merkatz 等最先发现怀有 DS 胎儿的孕妇，血清 AFP 水平为正常孕妇的 70%。1987年 Bogart 等发现怀有 DS 胎儿的孕妇，血清中的β-hCG 的水平是正常孕妇的 2 倍。1988 年 Canick 等发现怀有 DS 胎儿的孕妇，血清中的uE3 的水平比正常孕妇低 25%。1993 年 Brambati 等发现怀有 DS 胎儿的孕妇，血清中妊娠相关血浆蛋白-A（PAPP-A）含量显著低于正常孕妇。单个血清学指标筛查 DS，检出率低且假阳性率高，逐渐被多指标联合筛查取代。孕中期 AFP、β-hCG 二联筛查，在 5％假阳性率情况下，DS 检出率为 60%～65%；加上 uE3，DS 检出率为 65%～77%。孕早期PAPP-A、β-hCG 二联筛查，DS 检出率率为 65%。目前，血清学筛查的主要模式为孕早期 PAPP-A、β-hCG 二联筛查，孕中期 AFP、β-hCG、uE3三联筛查。唐氏血清学筛查的具体操作流程1. 检测前抽取静脉血：抽孕妇肘前静脉血2～3mL，离心后取上清液保存于4℃低温冰箱，一周内完成检测。2. 实验室检测：采用相关仪器（不同实验室采用遗传不同）测定血清标志物：妊娠相关血浆蛋白-A(PAPP-A)、游离绒毛膜促性腺激素(Free β-hCG)、甲胎蛋白(AFP)、游离雌三醇(uE3)。孕早期测定PAPP-A、β-hCG，孕中期测定AFP、β-hCG、uE3。3. 风险计算：运用lifecycle筛查软件，输入孕妇血清标志物值、出生时间、体重、抽血日期、末次月经、孕周（月经不调者B超确定孕周）、胎数、是否有不良孕产史（包括自然流产、习惯性流产、死胎、死产、生育畸形儿情况）、有无胰岛素依赖性糖尿病史及吸烟史等信息，进行风险评估。4. 风险评估：21-三体风险值≥1/270为唐氏综合征高风险。如果评估为高风险的患者我们该怎么办？血清学筛查高风险孕妇常规建议进行介入性产前诊断，即通过绒毛活检术、羊膜腔穿刺术、脐带穿刺术等方法获取细胞，进行体外培养后，分析胎儿染色体核型。由于介入性产前诊断具有胎儿丢失、宫内感染、出血等风险，患者及其家属存在侥幸心理等原因，部分高风险孕妇拒绝进行产前诊断。目前国内很多机构也开展了无创性产前诊断，即通过检测母血中胎儿有核红细胞、游离DNA、游离RNA进行诊断。虽然取得了一定进步，但是由于母血中胎儿的遗传物质较少，其分离、富集方法繁琐复杂，且仅检测21-三体、18-三体、13-三体，价格昂贵（是唐氏血清学检查的4-6倍）。目前该技术在产前诊断中总体上仍处于市场推广阶段，不过年底个别省份有可能降到1000元以内。本文系崔向荣医生授权好大夫在线（www.haodf.com）发布，未经授权请勿转载。

近日常有患者于网上咨询，当出现反复移植失败时为什么要进行封闭抗体检查，主动免疫治疗对移植失败及复发性流产到底有什么作用，以及很多患者反映看不懂封闭抗体报告单，那今天生殖小青年，就对很多患者提出的问题进行一一解答！简介解释一下复发性流产和反复种植失败在临床上的界定复发性自然流产（RSA）是指临床上连续2次或2次以上的自然流产（包括：多次生化妊娠、空孕囊、无胎心、胎心消失等），是一种常见的妊娠并发症，发生率占妊娠总数的0.4%～0.8%。RSA 中约有40%～80%临床上找不到明确病因，称为不明原因反复自然流产。反复种植失败的定义并没有统一的标准，大家比较认同的定义为：重复IVF治疗超过 3个移植周期；或者累计移植≥10个高评分胚胎未能怀孕者；或者各中心自定义移植胚胎数目。由于近年来单胚胎移植和囊胚培养技术普及，过去的标准显然不适用了，因此有人提出以胚胎计算的标准，如累计移植4枚高评分胚胎，或2枚囊胚仍然不能怀孕者。什么叫主动免疫缺陷，它和复性流产有什么关系？主动免疫缺陷：这类患者的体内不能产生保护胚胎的主动免疫抗体，对胚胎产生了免疫攻击，就是我们常说的“封闭抗体”缺乏，可以通过丈夫淋巴细胞的注射，诱导自身的主动免疫功能。但是目前我们采用的流式细胞仪的检测方法，并不能真正反映自体的主动免疫状态，因此治疗存在一定的盲目性。1981年，来自英国的Taylor和 美国的Beer 等创立了反复流产的主动免疫疗法，首次采用淋巴细胞人为的强化妊娠的免疫学维持机制，成功治愈原因不明性习惯性流产患者，开辟了反复流产治疗的新途径。此后，国内专家林其德等（1996 年）也将主动免疫疗法成功的应用于反复流产患者的治疗。如何解读封闭抗体报告单封闭抗体是妊娠时母体的一种胚胎保护性抗体，可以防止胚胎滋养层的父系抗体被母体免疫系统识别和攻击，使胚胎得到保护并生长发育。母体缺乏封闭抗体可能对胚胎儿产生排斥反应，孕早期出现流产，孕晚期出现妊娠高血压综合征、胎儿宫内生长迟缓、甚至胎死宫内。按理论来说，正常妊娠的女性体内应该可以检测出“封闭抗体”，在同种免疫型复发性自然流产女性中，通常缺乏此种抗体。“封闭抗体”缺乏而导致的一系列反应是免疫系统淋巴细胞比例和功能的改变，如：具有细胞毒性的T细胞增多、具有免疫抑制功能的T细胞减少、自然杀伤细胞数量和毒性的增加等，胚胎和胎盘等成为免疫细胞攻击的靶点，胎盘血管生成出现障碍。由于“封闭抗体”有很多种，至少包括：抗HLA-D/DR抗体、抗丈夫淋巴细胞毒抗体(APCA)、抗TLX抗体(滋养层及淋巴细胞交叉反应抗体，Ab1)、抗独特型抗体（Ab2）、混合淋巴细胞反应封闭抗体(MLR-Bf)、抗Fc受体抗体等等，一般通过细胞毒性试验或夫妇间的淋巴细胞混合培养反应来检测，目前很多实验室只测其中某一个指标来下诊断结论,往往不是很全面，所以很多人查不出“封闭抗体”是阳性。由于目前多采用流式细胞术对T淋巴细胞及其亚群检测来间接分析封闭抗体，所以我在这里主要对T淋巴细胞检测进行详细解说。在正常妊娠早期，CD8+细胞数量增多，CD4+/CD8+比值的降低，有利于胚胎免遭母体免疫系统的排斥，因为CD8+细胞在机体的免疫反应中发挥负调节作用，即可抑制B细胞介导的体液免疫，又可抑制CD4+细胞介导的迟发型超敏反应和增殖反应，还可对自然杀伤细胞及巨噬细胞的杀伤功能产生调控作用。在研究报导，RSA患者外周血中CD8+细胞百分率显著下降，CD4+/CD8+比值明显升高，有效治疗后可逆转。因此动态了解T淋巴细胞及亚九群的变化，对疾病的判断具有重要意义。分类细胞表型项目名称参考值不值实验室有不同参考值对照值直接检测男性全血T亚群CD3+T60-80%CD3+ CD4+Th30.09-40.4%CD3+ CD8+Ts20.74-29.4%测定值男性全血添加女性血清后检测T亚群CD3+T-260-80%CD3+ CD4+Th-230.09-40.4%CD3+ CD8+Ts-220.74-40.4%封闭效率对照值—测定值CD3-BET细胞封闭效率>0CD4-BETh细胞封闭效率>0CD8-BETs细胞封闭效率>0封闭抗体结果分析对照组：直接检测男性全血T亚群；测定组：向男性全血加女性血清后再检测T亚群；封闭效率：即直接检测男性全血的结果减去对应加了女性血清的结果所得的差值，其正常值>0。主动免疫治疗流程主动免疫的整个流程并不复杂，对于实验操作人员来讲，就是离心离心再离心，事个过程就是离心等时间的过程，所以敬请各位患者朋友在实验室外等候时不要焦虑，从整个流程下来来看，每个患者一般从采完血到注射完大约需要1.5个小时，请大家一定要进行耐心等待。（1）免疫原可为丈夫或第三方的淋巴细胞，皮内注射。供受者双方无血缘关系。供受者双方均需筛查输血前全套，肝炎系列、HIV、梅毒等均无异常方可进行此项治疗，孕前开始治疗；（2）采集供血者静脉血肝素搞凝静脉血25ml，去掉注射针头，缓慢加入事先准备好的加有10ml生理盐水的无菌培养瓶内，轻轻混匀，将培养瓶放入超净工作台内，室温静置15min；（3）用巴斯德管将生理盐水稀释后的35ml肝素化血液分别加入事先准备好的3支各加有4ml淋巴细胞分离液的无菌离心管中，操作时注意将血液沿管壁慢慢加入，使分离液与血液形成整齐的液面；（4）将离心管放入自动平衡离心机内，以2500rpm室温离心20min，小心取出离心管，在超净工作台内，将上层血浆吸出，弃掉；（5）小心吸取中间液面上白色雾状的单核细胞，转入2支新的离心管，加入生理盐水，轻轻吹打混匀，以2300rpm室温离心10min，弃上清，加入适量生理盐水，轻轻吹打混匀，将2支离心管内的细胞并入1支离心管内，以2000rpm室温离心8min，弃上清，加入1.2ml生理盐水，混匀，细胞浓度约为（20-40）×106/ml；（6）将所得的淋巴细胞悬液，于患者前臂分6处作皮内注射，每处200微升（注：由于1ml皮试注射器推注时压力较大，须用手将注射针脱开，造成淋巴细胞液喷出浪费）。

胎停育临床上也被称作“稽留流产”。是指宫内孕胚胎发育到一定阶段死亡而停止继续发育，导致在28周以前的妊娠终止。如果准妈妈停经已经大于6周，但宫腔内没有发现妊娠囊;或妊娠囊已经变形，没有张力;在妊娠囊直径超过4厘米的情况下，却看不到胎芽;胎芽超过1.5厘米却看不到胎心搏动;或是通过常规检查发现原本正常的胎心消失了，都可能被诊断为胎停育。1．80%的胎停育发生在妊娠12周以前。一些准妈妈因为受到“很大月份遭遇胎停育，很悲伤地去做引产”等新闻报道的影响，整个孕期都对胎停育忧心忡忡。其实这种担心是不必要的。研究表明，80%的胎停育发生在妊娠12周以前，其中更多的发生在8周以前。如果胚胎染色体本身没有问题，胎儿发育器官也没有异常，在怀孕15周以后发生胎停育的可能性只有0.6%。 警惕胎停育信号。怀孕12周以前很难做到在家中监测胎心，准妈妈可以通过观察孕早期的恶心、呕吐等妊娠反应或是乳房胀痛的症状是否持续、是否突然减弱或消失来尽早发现胎停育的问题。如果出现阴道出血或强于月经的剧烈下腹痛，就需要及时就医。2．50%的胎停育是一种优胜劣汰。有些准妈妈对胎停育非常紧张，甚至觉得如果一旦发生胎停育，就说明自己没有能力留住孩子，而过分自责和内疚。其实，对于孕早期的流产或胎停育，50%的原因源于胚胎染色体本身的异常，是一种自然的优胜劣汰的过程。即使医生想尽一切办法帮准妈妈保住了孩子，孩子的质量也可能并不高。所以，对于准妈妈来说，对怀孕分娩这件事应该抱有一颗平常心，不要过于强求，也不要总是紧张焦虑。紧张焦虑的情绪本身对胎儿也会有不利的影响。一旦确诊胎停育，要积极配合医生尽快终止妊娠。一部分遭遇胎停育的准妈妈，自身并没有明显的症状表现，没有腹痛也没有阴道出血，只是在进行常规产检时发现胎儿停止发育了，被诊断胎停育。当医生建议终止妊娠时，准妈妈往往不能接受，不愿意面对现实，本能地想要再等等看。实际上，胎儿一旦停止发育，胎心消失，就没有再保胎的必要了。而且胎停育后，胚胎会释放出一些物质，导致母体的凝血功能异常。对于胚胎没能自然排出的准妈妈，如果不及时将妊娠组织从宫腔内清除，可能造成大出血或不完全流产等严重后果。长期未排出的胚胎一旦肌化，想要清除干净，对子宫内膜的创伤也会非常巨大，会直接影响到未来的再次怀孕。一旦发生胎停育，流产后至少3个月才能再怀孕。一般会建议准妈妈，在胎停育流产后，至少要来3次月经后，才能准备再次怀孕。如果准妈妈年龄不大，也没有其他因素的影响，能够多休养一段时间，让子宫得到更充分的恢复会更好。有过胎停育病史的准妈妈，再次怀孕出现胎停育的风险会增加。最新相关数据表明，有过一次胎停育病史的准妈妈，再次怀孕发生胎停育的风险增加到20%;有过两次胎停育病史的准妈妈，第三次怀孕发生胎停育的风险增加到28%;有过三次或者以上胎停育病史的准妈妈，再次怀孕发生胎停育的几率将达到43%。3了解导致胎停育的常见原因，积极防患于未然。除了染色体本身有问题导致的胎停育，准妈妈身体的一些隐患也是导致胎停育的罪魁祸首。在准备怀孕之前，未准妈妈可以通过调整生活习惯、调理身体、孕前检查等方式，把这些隐患降到最低。而对于有过胎停育病史的准妈妈，一定要认真查清导致胎停育的原因，积极对症治疗，排除造成胎停育的身体隐患，以保证再次怀孕能够顺利。1.黄体功能不足：支持胚胎发育的孕激素在怀孕最初8周，来自妈妈的卵巢，8周之后来自胎盘。如果准妈妈卵巢功能不好，怀孕后体内就无法分泌足够的孕激素来维持胚胎的发育，就可能导致胎停育的问题。因此，对于月经不规律、黄体功能不佳的未准妈妈，最好调理身体，改善了内分泌失调的状况后再准备怀孕。对于因为黄体功能不佳导致过胎停育的准妈妈，再次怀孕时最好尽早在医生指导下补充孕激素，以维持正常的激素水平。2.甲状腺功能异常：除了黄体功能不足，另一个因为内分泌紊乱导致胎停育的重要原因就是甲状腺功能异常。准妈妈如果存在甲亢或是甲减的问题，都可能导致胚胎停育、流产或胎儿畸形。因为很多甲状腺功能异常的人并没有明显症状，建议准妈妈在孕前检查时，最好进行相关的检查，加以排除。3.子宫异常：先天或后天的子宫异常有很多类型，比如子宫纵膈、子宫肌瘤、宫腔粘连等，都存在导致胎停育的风险。好在很大一部分的子宫异常问题，都可以通过B超等妇科检查及时发现，在怀孕前治疗和改善。因为子宫异常导致过胎停育的准妈妈，一定要首先治疗好子宫的相关疾病后，再准备下一次的怀孕。4.感染：通常在孕前检查或是孕早期产检时，医生都会建议准妈妈进行优生五项又名致畸五项(英文缩写TORCH)的检查。通过对病毒抗体的检查，来判断准妈妈的身体是否处在某种病毒的急性感染期。如果准妈妈处在风疹、巨细胞或是弓形体等病毒的急性感染期，的确可能导致胚胎的畸形或死亡。建议准妈妈度过急性感染期，IgM抗体转阴后，再受孕比较妥当。5.高龄：随着准妈妈年龄的增长，导致胎停育的几率也会逐渐增加。最新资料显示，准妈妈年龄处于20~30岁之间，发生胎停育的几率只有9%~17%;如果到35岁，比例就上升到20%;40岁比例上升到40%;到45岁时，比例就高达80%了。6.有自然流产病史：发生胎停育的风险也会增加。因此，一旦发生自然流产，一定要查清原因，积极治疗，以免影响第二次怀孕。7.吸烟、喝酒：可能导致胚胎停育或致畸。因此，整个孕期，准妈妈都应该尽量保持健康的生活方式。8.用药不慎：准妈妈在怀孕早期如果服用了阿司匹林、布洛芬等解热镇痛药，就有导致胎停育的风险。因此，如果是计划怀孕的准妈妈，应该了解在孕早期出现嗜睡、头疼，甚至低烧等类似感冒的症状，可能是孕期反应的表现，用药一定要谨慎。9.叶酸水平低：如果准妈妈体内叶酸浓度过低，会增加6~12周胎停育的风险。因此，建议准备怀孕的未准妈妈从孕前3个月开始补充小剂量叶酸。10.精子异常：研究发现，准爸爸的精子异常，可能导致空泡卵的出现，也就是妊娠囊已经发育到很大了，却没有胎芽出现的情况。因此，准爸爸在准备怀孕阶段，要尽量规律作息、戒烟戒酒，保持健康的生活方式，这对提升精子质量是有很大帮助的。

很多妈妈在求子路上常苦于胚胎染色体异常，导致无法顺利怀孕、活产，而造成染色体异常的元凶有80%以上源自于卵子减数分裂异常。纺锤体在细胞分裂过程中，扮演着非常重要的角色，当细胞进行分裂时，染色体需要透过纺锤体的牵引帮助而移动，纺锤体的完整性决定了染色体分裂的正确性。因此不正常或受伤的纺锤体将使得细胞分裂停止或出现染色体的异常。如何看穿卵子减数分裂内部情形？如果我们可以看穿卵子内部减数分裂的情形，就有机会挑选出质量良好的卵子，降低胚胎染色体的异常率来提升怀孕率。由于在一般光学显微镜下，我们无法观察到卵子的纺锤体，因此我们需要特定的仪器对纺锤体进行观察。目前我们所用的纺锤体观测仪采用的是偏振光显微镜双折射的偏光原理，纺锤体会与细胞其他部分产生不同对比，再搭配图像系统转换成图像，在不伤害卵子的前提下即时反应细胞状态；除此之外可以定位纺锤体的位置，避免显微授精时破坏纺锤体。如何利用纺锤体观察仪来提高试管婴儿成功率？在二代试管进程中定位纺锤体位置：在传统ICSI过程中，胚胎学家主要通过第一极体的位置来判断卵子纺锤体的位置，将第一极体固定在6或12点钟方向，再从3或9点钟方向入针。但是纺锤体与第一极体的位置并非固定不变，山西省妇幼保健院生殖医学中心专家表示：根据统计，大约有10％的纺锤体和第一极体会成30～90度夹角，因此在精子注入卵子的过程中，仍然有机会刺伤卵子的纺锤体。而纺锤体观测仪可以让技术员在进行单一精子显微注射时，能够成功避开纺锤体，将操作造成伤害的可能性降低。尤其是对高龄（>38岁）或卵巢功能不佳（取卵数小于3颗）的患者效果最好。对卵子进行评估：胚胎学家指出：有纺锤体出现的卵母细胞有较高的受精率和胚胎发育率，也就是说纺锤体的存在与否，可以用来评价卵母细胞胞浆的成熟度。因此胚胎学家有三次通过纺锤体对我们的卵子进行评估的机会：（1）胚胎学家可以利用偏振光显微镜对卵子的纺锤体进行观察，通过定量分析数据对卵子进行分级，挑选出正常分裂的卵子，也就是出现纺锤体的卵子，进而提高试管婴儿的受精率。（2）胚胎学家还可以通过纺锤体来确定体外培养成熟卵子（IVM）的成熟期，进而为体外成熟卵子进行评估，最后提高试管婴儿的受精率和胚胎发育率。（3）由于纺锤体对环境温度的改变非常敏感。温度降至25℃时，只需要10分钟的时间，就会纺锤体造成不可逆的损伤。所以冷冻复苏过程中温度改变很有可能对卵母细胞纺锤体和染色体造成损伤。因此胚胎学家可以应用纺锤体成像帮助选择复苏后具有正常纺锤体的卵母细胞，进而可以提高受精率、卵裂率和临床妊娠率。综上所述，通过活体细胞的纺锤体成像技术可以避免辅助生殖技术对卵母细胞纺锤体的损伤，有助于选择具有正常纺锤体的卵母细胞，有利于提高受精率、卵裂率和临床妊娠率，利用更科学的方式，将让求子路的终点不再那么遥远。本文系崔向荣医生授权好大夫在线（www.haodf.com）发布，未经授权请勿转载。

不孕症的评估定义和病因：未用任何避孕措施，正常性生活一年以上仍未怀孕者，称不孕症。原发性不孕症指既往从未有过妊娠史，继发性不孕症指既往有过妊娠史。不孕症的发病率约为7.4%(人群不一样，不孕的原因也不相同。加拿大报道输卵管疾病占不孕原因的23.1%,排卵障碍占17.6%，子宫内膜异位占6.6%，男性因素占23.9%， 不明原因的占25.6%，其他如黄体功能不足、宫颈因素和子宫缺陷占3.2%(JAMA 2003; 290:1767)。35岁以上的女性如果同房6个月未孕，应尽早评估。如果不孕因素明确，如排卵障碍、盆腔疾病或已知男性不育等，应及时评估和治疗，不要等待。初始评估病史：是评估不孕症最重要的部分，大多数不孕原因可从病史中找出。现病史及婚育史：患者和伴侣的生育史、不孕症的年限、性交频率、润滑剂的使用及既往的不孕检查和治疗。妇科病史：月经初潮、月经周期特征(周期、经量、有无痛经和不适的表现)、初次性生活年龄、宫颈涂片结果、有无性传播疾病史、过去的避孕措施和末次月经。内科病史：有无糖尿病、甲状腺疾病、高血压、体重增加或减少、痤疮、多毛症溢乳或化疗放疗病史。手术史：有无盆腔或腹部手术史，如宫颈、输卵管、卵巢或子宫手术、阑尾切除术或子宫内膜异位症病灶去除术等。生活方式：是否吸烟、酗酒或吸毒，饮食及锻炼情况及生活压力等体格检查：体重和体重指数肥胖和黑棘皮症表明胰岛素抵抗。厌食症()的迹象：消瘦、头发干燥、胎毛样毛发、皮肤干燥、肤色暗黄唾液腺肿大及牙釉质腐蚀。雄激素过高的迹象：脸部、胸部和腹部多毛症(hirsutism)、痤疮、皮脂溢和秃顶等。甲状腺、乳房：检查甲状腺有无肿大或结节，有无溢乳。腹部和盆腔：检查有无盆腔炎、子宫平滑肌瘤、子宫内膜异位和先天性生殖泌尿系统异常。实验室检查：TSH、催乳素、血型、 Rh因子、抗体筛查、风疹、梅毒滴度、衣原体、淋病、乙/丙型肝炎病毒和艾滋病毒等。盆腔超声：评估子宫和卵巢的大体形态，宫腔超声造影评估子宫内膜息肉、黏膜下肌瘤和子宫畸形。不孕症的特异检查：特用于不孕症的检查并不复杂，可概括为以下3项：(1)精液分析评估男性因素，(2)排卵监测，和(3)子宫输卵管造影HSG)了解子宫或输卵管的通畅情况。不孕症检查项目多需在月经的特定天数进行(图9-3)。性交后试验、子宫内膜活检排除黄体期缺陷和精子抗体测试已被淘汰。精液分析:评估女性生育能力时要做精液分析近20%的不孕夫妇同时有男方和女方不孕因素。精液分析报告有时不容易解释，过去不同的实验室标准不同，目前通用2010年WHO精液检测标准。如果精液分析正常，可排除男性因素;如果初次检查不正常，需至少重复检查一次。禁欲2~7天，长时间禁欲超过10天，可能会减少精子的能动性和生育能力。射精量<1毫升时应排除样本收集失误，必要时检查射精后的尿液判断有无逆行射精。精液分析异常者需转至男性生殖专科，少精症需检测睾酮水平。如果异常，检测FSH、TSH、LH及催乳素水平。精液参数异常数目增多，男性不育几率下降。主要参数指精子浓度、活力和形态，如果1项参数异常，生育能力降低2~3倍， 2项异常生育能力降低5~7倍，3项均异常生育能力降低16倍。排卵测试:规律月经提示排卵正常，排卵监测可估计排卵的具体时间。基础体温:排卵的女性有双相体温，基础体温BBT)排卵当天或排卵前1天较低，LH释放后1~2天基础体温开始升高，持续10天左右。推荐使用特制的水银基础体温计，美国用华氏单位96~100 0F，高于0.5 0F即为显著。应在每天早上起床前测定体温。此方法简单、经济，但只反映既往排卵情况，基础体温升高时排卵已发生，故不能指导同房时间。排卵监测试纸:用来监测月经中期LH的释放。 LH峰可持续48~50h，通常在预期LH峰的前1~2天开始测试。需按照试纸说明使用，测试时间可不相同。月经周期为28天的女性，通常在第十天开始测试。月经紊乱的患者可每天测试，但费用增高。排卵前24~38hLH试纸呈阳性，不孕夫妇应在LH阳性当天及此后1天同房。如果计划做宫腔内人工授精(IUI)手术的，应在LH阳性后的第二天早上实施该手术。黄体中期血清孕酮水平:通常在月经18~24天、 LH峰值后7~8天、或下次月经来潮前1周测定。血清孕酮>19.08nmol/L(3ng/ml)表明有排卵。盆腔超声检查:可以检测到盆腔异常，比如子宫肌瘤、子宫中隔或卵巢囊肿。如果怀疑子宫息肉或黏膜下肌瘤，可考虑宫腔镜检查。计算窦状卵泡数测量卵巢体积来预测卵巢储备功能。观察排卵前卵泡大小，卵泡破裂前可达16~30 mm。输卵管通畅检查:子宫输卵管造影 可提供子宫和输卵管腔的基本解剖情况。识别输卵管梗阻的敏感性是85%~100%，特异性是90%。一般在月经周期的5~11天，或月经干净后的2~5天内行HSG检查(图9-3)，这样可以降低感染的风险，避免子宫内积血的干扰，并避免早期妊娠的可能。急性盆腔炎后的2个月经周期内应避免行HSG检查。为减轻疼痛，检查前30分钟可给予患者非甾体类消炎药，注入造影剂应缓慢。如果高度怀疑输卵管疾病，检查前1~2天开始口服多西环素100mg bid，共5天。如果HSG发现输卵管扩张，也应口服多西环素100mg bid，共5天。如果输卵管没有扩张或近期无盆腔炎病史，则无需预防性抗生素。有些少见情况下，注入造影剂可以导致输卵管痉挛从而使其远端不能充盈，造成假阳性结果，所以当HSG显示输卵管阻塞时，依然有输卵管通畅的可能，可以改日再做HSG或在腹腔镜直视下行输卵管通液检查。输卵管通液术此方法国内常用。经导管向宫腔内注入液体，根据阻力、液体回流和患者感觉判断输卵管是否通畅。也可在超声监测下进行。方法简单易行，避免使用X线，但不能提供客观的影像证据。美国不用此方法。腹腔镜输卵管通畅检查准确率最高，但创伤性最大，不作为不孕症初始评估的常规检查。不孕症患者有其他腹腔镜检查指征时可经宫颈插管注入亚甲蓝(美蓝)液来卵巢储备功能检查:卵巢储备功能并无统一定义，这些妇女通常有规律月经，但卵泡数量减少，对促排卵药物反应差。卵巢储备功能下降的妇女仍可自行怀孕。不同机构用的测试方法不完全相同，界值(cutoff values)的选择对检测方法的敏感性和特异性影响很大，各种方法的评估见表9-2 (OG 2015; 125: 268)。抗苗勒氏管激素(AMH)和窦卵泡计数是预测卵巢对促排卵药物反应的最佳方法，但任何一种方法都不能用来预测能否自行怀孕。适应证:年龄大于35岁规律性生活6个月后仍不怀孕、早绝经家族史、卵巢损伤疾患(内异症或盆腔炎)、肿瘤化疗或放疗、卵巢手术史、吸烟和一些基因染色体疾病(45X和Fragile X)。血清标记物:FSH、 雌二醇(estradiol, E2)和抑制素B(inhibin B)：一般在月经周期的第2~4天检测，第3天是标准。 因激素水平波动很大，如不正常应至少再测1次。FSH 10~15 IU/L之间提示卵巢储备功能可能下降， >20 IU/L卵子很难用于体外受精。雌二醇>220.2~293.6pmol/L(60-80pg/ml)提示卵巢储备功能下降，用于协助分析FSH值，由于负反馈， 雌二醇升高，FSH可降低。雌二醇和抑制素B预测卵巢储备功能价值不大，不单独应用。抗苗勒氏管激素(AMH)：是评价卵巢储备的新方法，月经周期任何时间都能检测。 AMH由窦前卵泡和早期窦状卵泡分泌，反映原始卵泡池的大小，绝经后测不到。 IVF时AMH<0.5ng/ml表明卵巢储备功能不良。氯米芬刺激试验(CCCT)：月经周期第3天检查FSH、 E2，周期第5~9天每日给予氯米芬100毫克，周期第10天检测FSH。 CCCT预测卵巢储备功能的敏感性比单纯FSH高，但特异性低，不作为常规检查。窦卵泡计数:窦卵泡指2~10mm的卵泡，在月经周期的第2~5天用阴道超声检测。窦卵泡计数(antral follicle count)低于3~6个提示卵巢功能下降。宫腔镜、腹腔镜或宫/腹腔镜联合检查:宫腔镜用于宫腔内病变的诊断及治疗。腹腔镜指征：内异症、盆腔痛、盆腔手术史及宫外孕史等。腹腔镜可明确输卵管情况，有腹腔镜指征的患者可以不做HSG，直接在腹腔镜下通亚甲蓝液观察输卵管是否通畅。有些宫外孕患者行输卵管造口术后，造口处持续开放，只有腹腔镜下注液才能鉴别输卵管伞部是否通畅。何时去不孕专科/生殖中心就诊年龄大于35岁，宜尽早送病人到不孕专科/生殖中心! 随着年龄增大，自然受孕率下降、 IVF成功率降低及流产率增高。如果排卵障碍是不孕的明确病因，可进行3~6周期促排卵治疗。切忌耽误时间!年龄小于35岁，如果病史和体检没有发现明显异常，患者可尝试自然受孕12个月，如果未孕，做不孕症的各项检查。排卵障碍的患者，可诱发排卵3~6个周期。如果诱发排卵失败或其他因素不孕时，需到不孕不育专科就诊。

双方在前期检查中需注意，男方进行精液检查前需要禁欲3-7天才行，所以夫妻双方只需注意好时间安排即可同房啦~不过，女性月经期同房易感染子宫内膜，甚至可累及输卵管和盆腔器官，最好不要在月经期同房哦。试管降调阶段试管婴儿降调期间，夫妻双方可以适当同房，但是在这个期间，同房需要注意使用安全措施，使用安全套是降调阶段的必要准备。试管促排卵阶段促排卵期间，前5天卵泡较小，同房需要注意尽可能温柔对待对方，促排第5天之后，卵泡逐渐长大，这时候夫妻双方就需要禁止同房了。此阶段，女性尽量穿平底舒适的鞋子。取卵试管取卵期间，由于将卵泡从女方体内取出，此时身体容易感染，所以取卵期间禁止同房。移植移植后患者需要禁欲，半个月内是不允许有性生活的。这个阶段是胚胎着床和发育时期，女性生理条件较为敏感且脆弱，为了让老婆能顺利怀上宝宝，做丈夫的需要体谅和配合妻子。试管婴儿期间尽量不要同房。①因为同房会影响到阴道的卫生以及刺激到子宫收缩，所以在进行试管婴儿期间最好是不要同房，同房可能会影响到阴道的卫生，造成感染，进而影响到试管婴儿移植后的手术效果。②在试管婴儿移植后前三个月最好也不要同房，以免发生胎停育、流产等现象。其实最好是等到分娩后，身体恢复得差不多了再考虑同房的问题。试管婴儿与自然受孕不同，更需要小心翼翼地保胎、安胎。③如果试管婴儿移植失败，医生也建议最好在移植失败一个月后再考虑同房。因为胚胎移植过程对女方生殖道可能有些损伤，加上治疗期间的用药，这时候需要给内分泌及子宫内膜一个恢复的时间。待女方调养身体后，再进行性生活，但同时也需要注意个人卫生及阴部清洁。

1.什么是封闭抗体?什么是淋巴细胞皮内注射治疗? 封闭抗体是人类白细胞抗原、滋养层及淋巴细胞交叉反应抗原刺激母体免疫系统后，所产生的一类保护胚胎的IgG抗体，其中HLA是最重要的封闭抗体。淋巴细胞皮内注射治疗，俗称：“免疫治疗”，是治疗复发流产的重要手段之一。治疗方法为抽取丈夫和/或第三方的血液，分离血液中的淋巴细胞，再将淋巴细胞注射入女方的手臂内侧皮内的过程。大部分患者经过淋巴细胞皮内注射治疗后会产生封闭抗体，我院将HLA转阳作为疗效指标。2.什么情况下患者需要行淋巴细胞皮内注射治疗? 研究表明，近50%生育后的女性封闭抗体为阴性。但在某些特殊情况下，母体的免疫系统可能对胚胎细胞的识别发生障碍，母体内的淋巴细胞易将子宫这一特殊环境内的胚胎细胞误认为异常细胞，加以排斥或杀伤，导致胚胎难以种植或多次流产。淋巴细胞皮内注射治疗不但可诱导体内产生保护性的封闭抗体，而且还有助于调整异常的免疫指标，从一定程度上帮助胚胎着床，降低流产风险。因此我们只是针对复发性流产和反复胚胎种植失败的患者进行淋巴细胞皮内注射治疗。3..经过淋巴细胞皮内注射治疗后，封闭抗体转为阳性，还会再次发生流产吗? 引起复发性流产的原因是多方面的，封闭抗体阳性不是复发性流产治疗成功的特异性指标，即使经过淋巴细胞皮内注射治疗，产生了封闭抗体，也有可能再次发生流产。此外，研究表明，约28%的复发性流产患者未经淋巴免疫治疗，体内也存在封闭抗体，但这部分患者依然会发生流产。所以，找寻和确认复发性流出那的病因至关重要，不能只是根据封闭抗体阳性与否来判断是否会再次发生流产。

不孕不育，越来越常见。在男性不育（也就是男方因素导致不育）里，主要是少弱精子症、畸形精子症、无精症等等原因。不过，精子出了问题，并不意味与孩子无缘。辅助生殖技术为很多家庭带来了希望，但辅助生殖技术有好几种，包括人工授精与试管婴儿，它们各自有何不同呢？男方原因所致的不育，又该选什么样的辅助生殖技术呢？辅助生殖技术主要包括人工授精和试管婴儿（体外受精-胚胎移植）两大类。其中，人工授精，就是先把男方精液取出来，进行体外洗涤和优化处理，找出活力好的那部分精子，在女方排卵日的时候，通过注射装置输送到女方的子宫腔内，让精子和卵子在女方体内自然结合，整个过程是没有痛苦的。试管婴儿包括了第一代、第二代和第三代试管婴儿。第一代试管婴儿是把男方的精子和女方的卵子都取出来，然后在一个培养皿中受精并发育成胚胎，医生再从中选择优质的胚胎移植回女方的子宫内，让其着床发育；这种技术只是提供一个平台让精子跟卵子很好地结合，医生不直接干预哪个精子跟卵子结合；主要针对女性输卵管因素的不孕症。但第二代试管婴儿则不同，它叫卵胞浆内单精子显微注射（ICSI），是在显微设备下，医生直接将单个精子注射入卵母细胞浆内使其受精，换句话说，就是这个精子必须靠人帮忙，才能跟卵子结合；主要针对少、弱、畸形精子症的男性不育患者。而第三代试管婴儿是在第二代试管婴儿的基础上，进行了遗传学诊断，挑出健康的胚胎再移植回子宫内。各种辅助生殖技术之间并不是谁比谁好的关系，而是各自有各自的适应症。精子出了问题，适合选择哪种辅助生殖技术？首先，精子出了问题，还是要先找原因，看看能否通过其他办法治疗，比如通过吃药、手术等提高精液的质量。通常，我们会观察3个月到半年；年龄比较大的患者，可能观察3个月，而年轻的患者，我们还是建议观察半年左右，看看有没有机会自己怀孕；毕竟，在精子跟卵子的结合也是一个优胜劣汰的过程，符合自然规律。经过了治疗观察以后，还是没有成功怀孕。那我们就可以考虑辅助生殖技术。如果女方排卵正常，也不存在输卵管堵塞等问题，男方只是轻中度的少精子症或弱精子症，并非严重畸形精子症，可以选择人工授精的辅助生殖手段；另外，因性功能障碍、射精障碍（逆行射精或早泄）等，或精液液化异常，以及存在一些免疫因素的不育，也适合选用人工授精；哪怕男方没有精子（无精症），只要女方正常，也可用人工授精，只是取精子库的精子来做辅助生殖。如果做了三次人工授精，都失败，一般就要做第一代试管婴儿，当然，有的人可以继续再尝试几次人工授精。但如果是严重少、弱、畸形精子症，可能一开始就应该选择做试管婴儿。至于第二代试管婴儿技术，主要是适用于极度少精子症、弱精子症、畸精子症；严重的少弱畸精子症（精子密度<5×106/ml，活力（a+b）<10%，正常形态率<4%）；精子顶体异常；不可逆的梗阻性无精子症（复通手术失败，但显微镜下还能找到精子）；生精功能障碍（非梗阻性无精子症，排除遗传因素)等男方因素所致的不育。< span="">不育。<-->不育。而第三代试管婴儿技术，主要是在需要筛查遗传疾病的时候用，比如说筛查地贫、染色体易位等等。目前辅助生殖的成功率如何？目前人工授精的妊娠率大约是10%-15%，若是男方因素造成不育而选择做试管婴儿的，全国平均水平是40%-50%的成功率（包括第一代和第二代技术），而我中心已达到50%以上。