PCR 技术具有特异性强、灵敏义高该项技术已在医学领域以及皮肤病检查中广泛应用,目前认为PCR技术是检测HPVDNA及分型的最好方法用新鲜病变组织、分泌物或粘液等标本,采用PCR技术对HPVDNA检测不仅用于临床HPV所致不同疾病,调查不同人群或个体HPV的感染率,而且更多用于HPV致病、致癌机理的研究中,大量研究表明用PCR技术检测HPV-DNA的阳性率远高于其它检测技术,是当今用于尖锐湿疣HPV(6/11型)以及与宫颈癌有相关性的HPV(16/18型)诊断最常用的有力工具
HPV是一种小DNA病毒。直径45-55nm,衣壳二十面立体对称,含72个壳微粒,HPV基因组是一闭合环状双股DNA,HPV通过直接或间接接触污染物品或性传播感染人类,病毒感染后只停留在皮肤和粘膜中寻常疣,俗称刺瘊:主要是1、2、4型,可发生于任何部位,手部多见跖疣:主要是2、4型,生长在胼胝不面,行走时易引起疼痛扁平疣:主要是3、10型,好发于面部,手、臂、膝为多发性尖锐湿疣:主要是6、11型,好发于暧潮湿部位,以生殖器湿疣发生于最高,在性传播疾病有重要地位与宫颈癌相关的HPV:16、18型
血液在离体和病理状态下,其中的凝血酶原激活形成凝血酶,后者使纤维蛋白原转化为纤维蛋白而使血液在体外凝固或在体内形成血栓,同时纤溶酶原被激活成纤溶酶,使交联的纤维蛋白被降解,产生其特异性降解产物—D-dimer。 D —二聚体明显增高见于血栓性疾病、深部静脉血栓、急性心肌梗死、肺梗塞、DIC,在血栓前状态也可见其增高。 D —二聚体已广泛用于溶栓治疗的检测指标,血栓溶解其含量增高,血栓溶解完备其含量下降。 D —二聚体在继发性纤维蛋白溶解症时增高,在原发性纤维蛋白溶解症时正常,是二者鉴别的主要指标。
摘要 目的 通过分析甘肃省南部回族、东乡族、保安族、撒拉族和汉族杂居区—临夏回族自治州住院病人中艾滋病的血清学分析及流行状况调查,了解本地区人群中艾滋病的流行情况,为艾滋病的预防和治疗提供信息和依据。方法 通过对2007年至2008年临夏州人民医院住院患者共22317例病人抽血样进行艾滋病血清学监测,初筛阳性标本送甘肃省艾滋病确证中心实验室确认,分析该地区住院病人中艾滋病流行特征。结果 2007~2008年共完成检测22317例,共初筛检出HIV-Ab阳性8例,送送甘肃省艾滋病确证中心实验室确认,4例被确认为阳性;3例不确定,继续随访;1例确认为阴性。HIV-Ab阳性率为0.0314%。结论 2007~2008年本地区的艾滋病在住院病人中流行明显加快,预计今后HIV感染者将在从医院中检测出的可能性将大幅增长,为防止HIV进一步蔓延,需加大防治力度,特别是防止医院实验室技术人员、医护人员的职业暴露有重要指导意义。关键词 艾滋病 住院病人 流行 少数民族 HIV-Ab 艾滋病即获得性免疫缺陷综合症(AIDS),是由人类免疫缺陷病毒(HIV)感染机体后所引起的人体免疫功能、特别是是细胞免疫功能损伤的一类疾病,致死高、危害严重。艾滋病主要经性接触、血液和母婴垂直途径传播。艾滋病的检测目前常用血清学方法检测艾滋病抗体,如ELISA、快速凝集筛选试验、western blot印迹法等,常以ELISA方法进行HIV抗体筛选,western blot印迹法确证⑴。自1985年在中国发现第一例艾滋病感染者以来,其感染者人数逐年增加,引起了国家和医疗卫生以及生物科研领域的高度重视,对预防和控控制HIV的传播和扩散采取了许多相应的措施。近几年来通过检测发现艾滋病感染者从吸毒人群、临床输血人群逐渐转变为主要由性传播为主要传播途径,也就是说由以前的主要由特殊人群之间传播转变为在普通人群之间传播。这样传播可能更容易且速度会加快,近年来从医院普通就医者中发现的艾滋病感染者逐渐上升,这是一个信号,以后有许多艾滋病感染者将从医院发现,同时对HIV的医院内感染控制工作是一个考验。为此我们从2007年开始对住院病人入院时进行HVI-Ab初筛检测,初筛阳性标本按《全国艾滋病检测技术规范2004版》⑵要求送甘肃省艾滋病确证中心实验室确认,本文对2007-2008年度22317例住院病人艾滋病抗体检测情况进行统计分析,对在艾滋病新的流行形势下,加强艾滋病预防、医院内感染控制、治疗方面提供参考信息。1. 材料与方法1.1 实验对象 2007年至2008年来临夏州医院住院的所有患难22317例。年龄3天至81岁,男性:11200例;女性:11117例,其中汉族9820例;回族8925例;东乡族2232例;保安族、撒拉族等其它少数民族1340例。1.2 方法 所有患者入院时空腹采血,分离血清,采用第三代艾滋病抗体ELISA检测试剂进行检测,初筛阳性样本用原检测试剂加另一厂家试剂复检,如两种试剂均阴性,报告阴性;如出现两种试剂均阳性或一阴一阳,送临夏州疾病控制中心初筛中心实验室复检,再转送甘肃省艾滋病确证中心实验室确认。1.3 仪器和试剂 使用郑州安图Anthos2010酶标仪, 郑州安图洗板机,HIV-Ab检测试剂使用:北京金豪制药有限公司和北京华大吉比爱生物技术有限公司的抗-HIV ELISA试剂。2 结果2.1在22317例检测样品中,共初筛检出HIV-Ab阳性8例,送甘肃省艾滋病确证中心实验室确认,4例被确认为阳性;3例样本确认为不确定,继续随访;1例确认为阴性。该人群中HIV-Ab阳性率为0.0314%。2.2在初筛检出的HIV-Ab阳性的8例样本,送省艾滋病确证中心实验室确认为阳性的WB检测法的结果和不确定的WB检测结果如下表1。表1 HIV-Ab筛选阳性的样本在确认实验室的检测结果编 性 年 民 文 化 程号 别 龄 族 度HIV-Ab检测结果确证实验室WB检测结果⑷北京金豪 吉比爱s/co s/co1 男 32 回 文盲 27.4 17.5 gp160/gp120/p66/p55/p51/gp41/p31/p24/p172 女 32 回 文盲 27.4 20.5 gp160/gp120/p66/p55/p51/gp41/p31/p24/p173 女 27 汉 高中 17.7 23.9 gp160(结果为不确定)复检 gp160/p24(结果为不确定)4 女 32 汉 大专 27.4 21.7 gp160/gp120/p66/p55/p51/gp41/p31/p24/p175 男 43 汉 大专 26.3 10.9 gp160/p24 (结果为不确定)6 女 28 汉 高中 4.4 4.35 p24(结果为不确定)7 男 36 回 文盲 27.4 18.7 gp160/gp120/p66/p55/gp41/p31/p24/p178 女 28 汉 高中 11.5 0.31 阴性注:北京金豪:北京金豪制药有限公司;吉比爱:北京华大吉比爱生物技术有限公司。3 讨论 近年来随着艾滋病主要从特殊人群之间传播趋势转变为在普通人群之间的传播趋势,从医院普通病人中初筛检测出滋病抗体阳性的几率越来越多。所以医院院内感染控制工作应把艾滋病的初筛检测及医务人员的职业暴露的防护工作应加强。HIV检测不同于普通病原体的检验,检测结果如果造成假阳性或假阴性,都引起严重后果,所以检测要求很高⑶,应按照《全国艾滋病检测技术规范》⑵的要求进行检测。我们在初筛检测中应用两种ELISA试剂检测,保证了试验的特异性。经初筛阳性标本和一阴一阳标本经WB确证,有4例是阳性,3例检测出了部分条带,被判为不确定,其中有一例标本经三月后再次送确认实验室做WB,又被判为不确定,是何原因有待研究。从本次试验统计中可发现,ELISA实验中随着S/CO值的增高,其与确证试验的阳符合率也随之升高。但是S/CO高的标本也有被WB法确认为不确定,S/CO低的标本也不能判为阴性。所以我们初筛实验室必须严格按《全国艾滋病检测技术规范》的要求对初筛阳性的标本和一阴一阳的标本必须送上级确证实验室做WB确认。参考文献⑴邓长生 符小华 李伟扬编 《诊断学》人民卫生出版社.⑵《全国艾滋病检测技术规范》2004年版⑶中国艾滋病防治信息.2008年第2期.总第6期.⑷为甘肃省疾病控制中心艾滋病确认中心检测数据。
HBV-DNA 、 HCV-RNA 等是病毒的核心成分,是病毒复制及有传染性的标志,是病毒感染的最直接、特异和灵敏指标。急性乙肝时, HBV-DNA 阳性超过 8 周可变慢性。在慢性感染时 HBV-DNA 可事例到肝细胞 DNA 中,称为整合型 HBV-DNA ,如 HBV 病毒基因已整合至宿主基因,治疗药物则难以到达,这是 HBV 不易从体内清除的重要原因之一。采用荧光定量 PCR 法检测病毒基因,既可以定性,又可以定量,其临床应用价格有: (1 )病情评估:肝炎病毒在肝细胞内大量复制是导致肝细胞免疫损伤的启动因素。血清 HBV-DNA 或 HCV-RNA 含量高低与肝脏病理损害程度相关, HBV-DNA 或 HCV-RNA 水平越高,肝组织炎症反应越重。据此,通过定量检测 HBV-DNA 或 HCV-RNA 含理可以间接评估慢性肝炎患者肝脏损伤的情况。 ( 2 )疗效观察:用抗病毒药物治疗慢性病毒性肝炎,治疗前病毒基因水平愈高,疗效越差;水平愈低,清除病毒可能性越大。相应地,在治疗过程中,病毒基因水平下降愈快,完全治愈的机会越大。因此可将肝炎病毒基因检测作为预测和观察抗病毒疗效的一种手段。 (3) 预后判断:( 1 )治疗或未经治疗的慢性病毒性肝炎,病毒基因水平保持稳定高浓度者预后不良;( 2 )垂直传播途径感染肝炎病毒者,病毒基因含量高,对各种抗病毒治疗的反应低,预后差;( 3 )病程中,尽管反映肝细胞损害的其它指标正常,但病毒基因水平经常波动者易发展为肝硬化。 ( 4 )药效验证:任何一种抗病毒药物,用肝功能或肝炎病毒免疫标志物来评价其疗效,均不够敏感和及时,若以荧光定量 PCR 法,检测病毒复制的被抑制程度,即病毒基因水平的高低来评价疗效,则较为理想。 目前检查乙肝病人最常用的方法是化验“两对半”,即乙肝病毒抗原和抗体的测定。但它检查的只是乙肝病毒的抗原和人体对这些抗原的免疫反应,并不能代表病毒本身,无法知道体内病毒的多少。 另一方法是聚合酶链反应,即PCR法,多年的临床实验证明,常规PCR法假阳性、假阴性率较高,重复性差,且不能定量。 近年,新研制成功的荧光定量PCR的出现为乙肝病毒的检测诊断提供了新手段,大量临床标本测定结果证明,其特异性为100%,灵敏度可达0.01fg(10?12mg),相当于2.5个乙肝病毒颗粒。荧光定量PCR对下列情况更具有独特的诊断价值: 1.治疗前进行病毒定量检测,可以指导选择对症药品,避免盲目用药。 2.治疗后定量PCR可直接准确地测定体内病毒数量,有助于疗效的判断。 3.怀孕前进行定量PCR测定,有助于选择有利的怀孕时机。乙肝孕妇进行定量PCR检查,有助于使部分病人得到及时、正确的诊断。 所以说HBV?DNA定量检测指标降低在乙肝治疗中有着非常重要的意义,是乙肝转阴的前奏,也是康复最为关键的一步,只有体内的HBV?DNA定量指标降低,病毒的复制繁殖才会停止,乙肝的彻底治愈才有希望。 一般以定量检测1.0×103copies/ml以下为阴性,以上为阳性。阳性提示体内病毒复制活跃,血液中含量高,传染性较强;阴性则相反,病毒复制已得到抑制,血液中含量底,传染性弱。
HBV-DNA 、 HCV-RNA 等是病毒的核心成分,是病毒复制及有传染性的标志,是病毒感染的最直接、特异和灵敏指标。急性乙肝时, HBV-DNA 阳性超过 8 周可变慢性。在慢性感染时 HBV-DNA 可事例到肝细胞 DNA 中,称为整合型 HBV-DNA ,如 HBV 病毒基因已整合至宿主基因,治疗药物则难以到达,这是 HBV 不易从体内清除的重要原因之一。采用荧光定量 PCR 法检测病毒基因,既可以定性,又可以定量,其临床应用价格有: ( 1 )病情评估:肝炎病毒在肝细胞内大量复制是导致肝细胞免疫损伤的启动因素。血清 HBV-DNA 或 HCV-RNA 含量高低与肝脏病理损害程度相关, HBV-DNA 或 HCV-RNA 水平越高,肝组织炎症反应越重。据此,通过定量检测 HBV-DNA 或 HCV-RNA 含理可以间接评估慢性肝炎患者肝脏损伤的情况。 ( 2 )疗效观察:用抗病毒药物治疗慢性病毒性肝炎,治疗前病毒基因水平愈高,疗效越差;水平愈低,清除病毒可能性越大。相应地,在治疗过程中,病毒基因水平下降愈快,完全治愈的机会越大。因此可将肝炎病毒基因检测作为预测和观察抗病毒疗效的一种手段。 (3) 预后判断:( 1 )治疗或未经治疗的慢性病毒性肝炎,病毒基因水平保持稳定高浓度者预后不良;( 2 )垂直传播途径感染肝炎病毒者,病毒基因含量高,对各种抗病毒治疗的反应低,预后差;( 3 )病程中,尽管反映肝细胞损害的其它指标正常,但病毒基因水平经常波动者易发展为肝硬化。 ( 4 )药效验证:任何一种抗病毒药物,用肝功能或肝炎病毒免疫标志物来评价其疗效,均不够敏感和及时,若以荧光定量 PCR 法,检测病毒复制的被抑制程度,即病毒基因水平的高低来评价疗效,则较为理想。